高效液相色谱法测定动物性食品中5种受体激动剂残留量
一、范围
本标准适用于动物食品中5种α2受体激动剂的制备和高效液相色谱串联质谱法测定5种α2受体激动剂本标准适用于猪肌肉、肝、肾组织和鸡肌肉、肝组织中替扎尼定、血清锌、溴甲胺、氨丙啶和可乐定残留量的测定。
二、原理
用碳酸钠缓冲液乙酸乙酯提取样品中残留的α2受体激动剂，固相萃取柱纯化，高效液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。
三、试剂和材料
除另有规定外所有试剂均为分析纯水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1乙腈（CH3CN）的色谱纯度为纯。
3.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯。
3.1.3甲醇（CH3OH)
3.1.4氨（NH 4 OH
3.1.5无水碳酸钠(Na2CO3)
3.1.6碳酸氢钠（NaHCO 3）
3.1.7乙酸乙酯（CH3COC2H2H5）
3.2 溶液配制
3.2.1碳酸钠溶液：取无水碳酸钠10.6g用水溶解稀释至100ml。
3.2.2碳酸氢钠溶液：8.4g碳酸氢钠溶于水稀释至100mL。
3.2.3碳酸钠缓冲液：取90毫升碳酸钠溶液和10毫升碳酸氢钠溶液混匀立即使用。
3.2.4甲酸溶液（0.2%）：1mL溶于水的甲酸稀释至500mL。
3.2.5甲酸乙腈溶液：取0.2%甲酸溶液80毫升加乙腈20毫升混匀。
3.2.6氨甲醇溶液（5%）取氨水5mL用甲醇溶解稀释至100mL。
3.3标准品：盐酸替扎尼定,盐酸西拉嗪,溴硝定,盐酸氨苄定,盐酸可乐定含量≥98%。
3.4 标准溶液制备
3.4.1标准储备液：盐酸替扎尼丁,盐酸萨拉齐定,盐酸溴莫尼丁,盐酸安普鲁丁和盐酸可乐定.分别用甲醇溶解和稀释.在10 mL瓶中制备盐酸替扎尼丁.盐酸沙拉嗪.盐酸溴莫尼丁.盐酸安培定和盐酸可乐定.在10 mL瓶中制得盐酸替萘啶.氯化钠.盐酸溴西定和盐酸可乐定.保质期为6个月。
3.4.2混合标准工作液：在100 mL瓶中用甲醇溶解稀释，制得标准工作液1mL，制得浓度为10μg/mL的混合标准工作液。2-8℃保存1个月。
3.4.3标准曲线的制备：分别用0.5μg/L、10μg/L和100μg·L配制标准工作液，用甲酸-乙腈溶液稀释，形成一系列混合标准工作液。用0.5、10、50和100μg·L混合标准溶液配制标准工作液。
3.5 材料
3.5.1固相萃取MCX柱：60mg/3ml或等效物。
3.5.2滤膜：有机相，0.22μm。
四、仪器和设备
4.1高效液相色谱串联质谱仪：分布喷雾电离源。
4.2分析天平：0.00001g和0.01g。
4.3 均质机。
4.4 离心机。
4.5 涡旋振荡器。
4.6 旋转蒸发仪。
4.7 固相萃取装置。
4.8 鸡心瓶。
4.9 离心管：50 mL。
五、测定步骤
5.1 提取
取供试品2g（精确至±20mg），置50ml离心管中，加碳酸钠缓冲液5ml，摇匀，加乙酸乙酯10ml，充分摇匀，8000 r/min离心5min，取上清液于鸡心瓶中。在下层溶液中加入醋酸乙酯10ml，重复提取一次，上清液合并两次在55°C蒸发至干燥，用甲酸-乙腈溶液4.0mL溶解残渣，备用..
5.2 净化
分别用3ml甲醇和3ml水活化mcx柱。取立柱备用液，分别用3mL水和3mL甲醇洗涤，挤压至干燥，用氨水洗脱6mL，收集洗脱液，在60°C旋转，蒸发至干燥，用1.0mL甲酸-乙腈溶液溶解残渣，过滤，进行高效液相色谱串联质谱法。
5.3 测定
5.3.1 色谱条件
a色谱柱：C18（100 m×3.0 mm，粒径1.8μm）或等效物；
b柱温：30℃；
c进样量：10 L；
d流速：0.3 mL/min；
e流动相：A：乙腈；B：0.2％甲酸溶液，梯度洗脱过程示于表1中。
5.3.2 质谱条件
a离子源：电喷雾离子源；
b扫描方式：正离子扫描；
c检测方式：多反应监测；
d离子源温度：150℃；
e脱溶剂温度：500℃；
f毛细管电压：3.0 V；
g定性离子对定量离子对锥孔电压和碰撞能量见表2。
5.3.1定量测定
取样品溶液及相应的标准工作溶液，按外标法定量峰面积。标准工作液和样品溶液中α2受体激动剂的响应值应在仪器检测的线性范围内在上述条件下，α2受体激动剂标准溶液的特征离子质量色谱见
六、结果计算和表述
试料中待测药物的残留量按式（1）计算：
式中：
X-试验材料中相应的HE2受体激动剂残基以微克/千克（单位g/kg）为单位。
Cs——标准溶液中α2受体激动剂的相应浓度，单位为μg/L（μg/L）；
在样品溶液中，对应的或2受体激动剂的色谱峰面积。
A S——标准溶液中α2受体激动剂的对应峰面积；
v-用于溶解残留在毫升(ML)中的溶液的体积；
m——供试试料质量，单位为克（g）；
从计算结果中扣除空白值，用平行测量的算术平均值表示测量结果，并保留两位有效数字。
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焦点事件
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标准
