丙泊酚乳状注射液的检查方法
pH值应为6.0~8.5(通则0631)乳粒取本品,照粒度和粒度分布测定法(通则0982第三法),依法检查(采用基于米氏散射理论的激光散射粒度分析仪,如 Mastersizer ms2000;建议参数为吸收率0,0.001或0.01,折射率1.47~1.52,遮光度5%~10%;或其他等同的仪器),或照动态光散射法检查(附件1),体积平均粒径或光强平均粒径应小于0.5m;另取本品,照基于单粒子光学传感技术的光阻法测定(附件2),大于5m乳粒加权总体积不得过油相体积的0.05%。游离脂肪酸取本品,作为供试品溶液;取棕榈酸对照品约0.1795g(若处方中含有油酸,则取棕榈酸对照品约0.3077g),精密称定,置100ml量瓶中,加正庚烷溶解并定量稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各1ml,分别置20ml具塞试管中,加异丙醇-正庚烷-0.5mol/L硫酸溶液(40:10:1)混合溶液5.0ml,振摇1分钟,放置10分钟。供试品溶液试管中精密加入正庚烷与水各3ml,对照品溶液试管中精密加入正庚烷2ml与水4ml,密塞,上下翻动10次,静置至少15分钟使分层。分别精密量取上层液3ml,置10ml离心管中,加尼罗蓝指示液(取硫酸尼罗蓝0.04g,加水200ml使溶解,加正庚烷100ml,振摇,弃去上层正庚烷,反复操作4次。取下层水溶液20ml,加无水乙醇180ml,混匀,置棕色瓶中,室温一个月内使用)1ml,在氮气流下,用氢氧化钠滴定液(0.01mol/L)滴定至溶液显淡紫色。供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液(0.01mo/L)的毫升数不得大于对照品溶液消耗氢氧化钠滴定液(0.01mol/L)的毫升数。过氧化值精密量取本品10ml,冻干或加无水乙醇20ml,于60℃水浴减压旋转蒸发除去水分。自“加无水乙醇20m”起,依法重复操作三次除尽水分。
加冰醋酸三氯甲烷(3:2)溶液30ml使残渣溶解。精密加饱和碘化钾溶液0.5ml,密塞,准确振摇萃取1分钟,加新沸并放冷的水30ml与淀粉指示液5ml,立即用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至上层水相蓝色消失,并将滴定的结果用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml。有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定,供试品溶液精密量取本品适量,用四氢呋喃-异丙醇(5:3)溶液定量稀释制成每1ml中约含丙泊酚1mg的溶液。对照溶液精密量取供试品溶液适量,用四氢呋喃-异丙醇(5:3)溶液定量稀释并制成每1ml中约含丙泊酚1g的溶液对照品溶液取杂质I对照品适量,精密称定,加四氢呋喃异丙醇(5:3)溶液溶解并定量稀释制成每1m中约含1μg的溶液。系统适用性溶液取丙泊酚与杂质Ⅱ对照品各适量,加四氢呋喃-异丙醇(5:3)溶液溶解并稀释制成每1m中约含丙泊酚1mg与杂质Ⅱ3g的溶液。色谱条件、系统适用性要求与测定法见丙泊酚有关物质项下。限度供试品溶液色谱图中如有与杂质Ⅰ保留时间一致的色谱峰,按外标法以峰面积计算,含杂质Ⅰ不得过丙泊酚标示量的0.1%;其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍(0.2%),其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的4倍(0.4%),小于对照溶液主峰面积0.2倍的色谱峰忽略不计。2,6-二异丙基-1,4苯醌(杂质Ⅱ)照高效液相色谱法(通则0512)测定。对照品溶液取杂质Ⅱ对照品适量,精密称定,加四氢呋喃-异丙醇(5:3)溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含1g的溶液色谱条件见有关物质项下。检测波长为254nm。供试品溶液、系统适用性溶液与系统适用性要求见有关物质项下。测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注入 液相色谱仪,记录色谱图。限度供试品溶液色谱图中如有与杂质Ⅱ保留时间一致的色谱峰,按外标法以峰面积计算,含杂质Ⅱ不得过丙泊酚标示量的0.1%。
甲氧基苯胺值照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定。供试品溶液精密量取本品10ml,置250ml圆底烧瓶中,加无水乙醇20ml,置60℃水浴减压旋转蒸发15分钟。自“加无水乙醇20m”起,依法重复操作三次除尽水分。加异丙醇-异辛烷(2:8)溶液使残渣溶解并定量转移至25m量瓶中,再加上述溶剂稀释至刻度,摇匀,用0.45μm的微孔滤膜滤过,取续滤液。测定法精密量取供试品溶液与异丙醇-异辛烷(2:8溶液各5ml,分别置甲、乙两支具塞试管中,各精密加0.25%4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液(临用新制)1ml,密塞,摇匀,避光准确放置10分钟,以异丙醇异辛烷(2:8)溶液为空白,在350nm的波长处分别测定吸光度A1、A2;另取供试品溶液,以异丙醇异辛烷(2:8)溶液为空白,在350nm的波长处测定吸光度A。。
按下式计算。甲氧基苯胺值25×[1.2×(A1-A2)-A0C×Vv式中V为供试品的取样量,ml;C为供试品中大豆油在处方中的标示量,g/ml;1.2为加入4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后溶液的稀释因子A1为甲具塞试管中溶液的吸光度值;A2为乙具塞试管中溶液的吸光度值;A。为未加入4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液的供试品溶液的吸光度值。限度不得过5.0。溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺照高效液相色谱法(通则0512)测定供试品溶液精密量取本品1m,置10m量瓶中,用异丙醇-正庚烷(2:1)溶液稀释至刻度,摇匀。系列对照品溶液取溶血磷脂酰胆碱对照品与溶血磷脂酰乙醇胺对照品各适量,精密称定,加三氯甲烷-甲醇(2:1)溶液适量使溶解,用异丙醇-正庚烷(2:1)溶液定量稀释制成每1ml中分别约含溶血磷脂酰胆碱0.02、0.04、0.1、0.2ng和溶血磷脂酰乙醇胺0.01、0.02、0.05、0.1mg的混合溶液系统适用性溶液取溶血磷脂酰乙醇胺对照品适量,加三氯甲烷-甲醇(2:1)溶液适量使溶解,用异丙醇-正庚烷(2:1)溶液稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液,量取该溶液0.5ml,加供试品溶液1ml,混匀。
色谱条件用二羟基丙基硅烷键合硅胶为填充剂(Ultimate diol,4.6mm×250mm,5m或效能相当的色谱柱);以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(85:15:0.5:0.05)为流动相A,以 正已烷异丙醇-流动相A(20:48:32)为流动相B,按下表进行梯度洗脱;流速为每分钟1.0ml;检测器为蒸发光散射检测器(以下参数供参考:雾化气为氮气,雾化气压力为25psi.,漂酩管温度为70℃);柱温为40℃;进样体积20l。时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)05系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,溶血磷脂酰乙醇胺峰与相邻峰的分离度应符合要求。测定法精密量取供试品溶液与系列对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。根据供试品中溶血磷脂酰胆的含量,选择系列对照品溶液中3个相邻浓度的对照品溶,以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程,由回归方程计算供试品溶液中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量。限度每1ml中含溶血磷脂酰胆碱不得过2.0mg,溶血磷脂酰乙醇胺不得过0.6mg甘油精密量取本品2ml,置锥形瓶中,加水100ml及溴甲酚紫指示液6滴,摇匀,若供试品溶液呈酸性,滴加0.1mo/L氢氧化钠溶液,使溶液呈蓝紫色;若供试品溶液呈碱性,应先嘀加0.5mol/L硫酸溶液调节至溶液恰呈黄色,再滴加1mol/L氢氧化钠溶液,使溶液呈蓝紫色,加0.7%高碘酸钾溶液(临用新制)100ml,置37~40℃水浴中保温15分钟,并不新振摇。加1,2-丙二醇3ml,放置5分钟,用氢氧化钠滴定液0.1mol/L)滴定至溶液呈蓝紫色。
每1m氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于9.2lmg的C3H8O3。每1ml中含甘油(C3H8O3)应为20.2~24.8mg磷照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液精密量取本品3ml,置坩埚中,加氧化锌缓慢灼烧至烟雾消失,将坩埚置600℃炽灼1小时,取出,冷,加盐酸溶液(1→2)10ml,缓缓加热至微沸,煮沸5分钟使残渣溶解,用水定量转移至100m1量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。对照品溶液取磷酸二氢钾对照品约0.135g,精密称定,置250ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取oml,置100ml量瓶中,加氧化锌2g与盐酸溶液(1→2)10ml使溶解,用水稀释至刻度,摇匀。测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液各5ml,分別置25ml量瓶中,依次分别加水10ml、钼酸铵硫酸溶液(取钼酸铵5g,加0.5mol/L硫酸溶液100ml使溶解)1ml、对苯二酚硫酸溶液(取对苯二酚0.5g,加0.14%硫酸溶液100m使溶解,临用新制)lnl与50%醋酸钠溶液3ml,用水稀释至刻度,摇匀,放置5分钟,在720nm波长处分别测定吸光度,并将 测定结果用空白试验校正,计算。限度每1ml中含磷(P)应为0.40~0.50mg渗透压摩尔浓度取本品,依法检查(通则0632),渗透压摩尔浓度应为280~330 mOsmol/kg细菌内毒素取本品,依法检查(通则1143),每1mg丙泊酚中含内毒素的量应小于0.33EU。其他应符合注射剂项下有关的各项规定(通则0102)。
