实验室分析仪器--色谱柱的常见问题一
键合硅胶固定相的稳定性
硅烷键合相的流失是由于硅烷键合于硅胶基质上的Si—O—Si键的水解,在高温、长值及水比例高的流动相中,离解加剧。因此稳定性与键合相的类型、流动相pH、所用缓种与有机改性剂的种类等有关,键合硅胶正相、反相、离子对和离子交换色谱柱的稳定差异。在相同条件下应用时,长链的烷基(如C18与C8)键合相固定相一般比短链的键合更稳定;交联型键合硅烷固定相可改善低pH值时键合相的稳定性,改善空间保护官能因色能够有效改善硅烷固定相在低pH值时的稳定性。两个异丙基、异丁基等体积较大的基团接于硅烷Si原子上,可以对Si—O—Si键有一定保护作用,这种固定相比常规的二甲基购硅烷键合相的含碳量少(表面覆盖率低),保留值小。
在PH≥7时稳定使用HPLC柱应遵循以下原则:
①使用致密键合的长链烷基(如C18、C8等)并经封尾的固定相
②使用以硅溶胶工艺制得的硅胶基质( Hypersil、 KromasilSpherisorb、 Zorbax等),以减少硅胶的溶解
③用有机的、枸櫞酸与硼酸盐缓冲液,以减少硅胶基质的溶解(尽可能避免使用磷酸盐、铵盐与碳酸盐)
④保持0.01~0.05molL的缓冲液浓度
⑤色谱柱温<40℃
⑥为使色谱柱稳定,用缓冲盐阳离子Li+>Na+>K+>NH4+;⑦加入碱性流动相添加剂(如三乙胺),以保持良好的分离重现性。表1比较了不同条件下统计的色谱柱分析样品次数。
表1 通常色谱柱进样次数
样品种类 | 正常分拆次数 |
1、干净样品(均匀溶液,其所有成分在每次样品进样之间能完全流出色谱柱) 2、复杂和脏样品,或在较为极端条件下分析的样品 3、生物或极为复杂的样品(如肝脏提取物、富含有机物的土壤等) 4、特殊情况下,没有预处理的样品一次进样导致柱头筛板堵塞或色谱柱头固定相变形,色谱柱失效 | 1000~2000 200~500 50~200 0 |
