青霉素V钾的鉴别检查方法
鉴别
(1)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致(2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集792图)一致(3)本品显钾盐鉴别(1)的反应(通则0301)。
检查
吸光度取本品,加0.lmol/L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1m中含1mg的溶液,照紫外-可见分光光度法(通则0401),在306nm的波长处测定,吸光度不得过0.33;另取本品,用上述氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每lml中含0.2mg的溶液,在274nm的波长处测定,吸光度不得小于0.50。结晶性取本品少许,依法检查(通则0981),应符合规定。酸碱度取本品,加水制成每1ml中含5mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为5.0~7.5。有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。临用新制。pH6.5磷酸盐缓冲液取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液125ml,加水250ml,混匀,用氢氧化钠试液调节pH值至6.5再用水稀释至500ml供试品溶液取本品适量,精密称定,加pH6.5磷酸盐缓冲液溶解并稀释制成每1ml中约含青霉素V3.6mg的溶液。对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置100m1量瓶中,用pH6.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度,摇匀。系统适用性溶液取青霉素ⅴ钾对照品和青霉素对照品各10mg,置10ml量瓶中,加pH6.5磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度,摇匀。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以pH3.5磷酸盐缓冲液(取0.5mol/L磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值至3.5)甲醇-水(10:30:60)为流动相A,以pH3.5磷酸盐缓冲液-甲醇-水(10:55:35)为流动相B,先以流动相A-流动相B(60:40)等度洗脱,待青霉素V峰洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度洗脱,检测波长为268nm;进样体积20l。时间(分钟)流动相A(%流动相B(%)050系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,青霉素V峰与青霉素峰之间的分离度应大于6.0。测定法精密量取供试品溶液和对照溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(1.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%),小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰忽略不计青霉素Ⅴ聚合物照分子排阻色谱法(通则0514)测定临用新制供试品溶液取本品约0.4g,精密称定,置10ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀对照溶液取青霉素Ⅴ对照品适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1m中约含0.2mg的溶液系统适用性溶液(1)取蓝色葡聚糖2000适量,加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。系统适用性溶液(2)称取本品约0.4g,置10ml量瓶中,加0.04ng/ml蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻度,摇匀。色谱条件用葡聚糖凝胶G10(40~120μm)为填充剂,玻璃柱内径:1.0~1.4cm,柱长:30~40cm;以pH7.0的o.lmol/L磷酸盐缓冲液[ω.1mol/L磷酸氢二钠溶液0.lmol/L磷酸二氢钠溶液(61:39)]为流动相A,以水为流动相B;流速为每分钟1.5ml;检测波长为254mm;进样体积100~200l系统适用性要求系统适用性溶液(1)分别在以流动相A与流动相B为流动相记录的色谱图中,按蓝色葡聚糖000峰计算,理论板数均不低于400,拖尾因子均应小于2.0,蓝色葡聚糖2000的保留时间比值应在0.93~1.07之间。系统适用性溶液(2)在以流动相A为流动相记录的色谱图中,高聚体的峰高与单体和高聚体之间的谷高比应大于2.0。对照溶液色谱图中主峰与供试品溶液色谱图中聚合物峰,与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93~1.07之间。以流动相B为流动 相,精密量取对照溶液连续进样5次,峰面积的相对标准偏差应不大于5.0%。测定法以流动相A为流动相,精密量取供试品溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图;以流动相B为流动相,精密量取对照溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图。限度按外标法以青霉素ⅴ峰面积计算,青霉素Ⅴ聚合物的量不得过0.6%水分取本品,照水分测定法(通则0832第一法1)测定,含水分不得过1.5%
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