红细胞比容的测定
实验概要
学习和掌握测定红细胞比容的方法。
实验原理
将定量的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中,定时、定速离心后,有形成分和血浆分离,上层呈淡黄色的液体是血浆,中间很薄一层为灰白色,即白细胞和血小板(或栓细胞),下层为暗红色的红细胞,彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度,可计算出红细胞在全血中的容积比值,即为红细胞比容(压积)。
主要试剂
草酸盐抗凝剂(0.8 g草酸钾•H2O 1.2 g草酸銨•H2O 甲醛1 ml 蒸馏水至100 ml)或10 g•L-1肝素,橡皮泥或半融化状态石蜡,75%酒精。
主要设备
温氏分血管,普通离心机,注射器,长针头,干棉球。
实验材料
鸡
实验步骤
1. 温氏分血管比容法
(1)取大试管和温氏分血管各一支,用抗凝剂处理后烘干备用。
(2)取血:可采取静脉取血或心脏取血,将血液沿大试管壁缓慢放入管内,用涂有凡仕林的大拇指堵住试管口,缓慢颠倒试管2~3次,让血液与抗凝剂充分混匀,并不能使血细胞破碎,制成抗凝血。
用带有长注针头的注射器,取抗凝血2 ml将其插入分血管的底部,缓慢放入,边放边抽出注射针头,使血液精确到10 cm刻度处。
(3)离心:将分血管以3000 r•min-1离心30 min,取出分血管,读取红细胞柱的高度,再以同样的转速离心5 min,再读取红细胞柱的高度,如果记录相同,该读数的1/10即为红细胞比容。
注意事项
1.选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩,而草酸銨使红细胞膨胀,二者配合使用可互相缓解。鱼类多用肝素抗凝。
2.血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。
3.用抗凝剂湿润的毛细玻璃管(或温氏分血管)内壁后要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确,血柱中不得有气泡。