出色灵敏度提升复杂基质中目标肽段定量能力（一）

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出色灵敏度提升复杂基质中目标肽段定量能力（一）

2020.5.18

前言

生物标志物的研究包括发现（Discovery），验证（Verification），确认（Validation）阶段，最后进入临床检验（Clinical Utilization）等更深入的阶段。在研究生物标志物的过程中，主要的挑战在于如何在成分复杂的生物样品中发现中等丰度或低丰度的蛋白质，这就对仪器性能提出了很高的要求，即仪器必须具备高灵敏度，以保证低丰度蛋白质的检出。

TSQ Quantiva 是赛默飞世尔科技在2013 年ASMS 上推出的全新一代三重四极杆质谱仪。TSQ Quantiva 采用主动离子管控技术(Active Ion Management，AIM)（图1）技术优化离子生成及从离子源至检测器的传输，使这款仪器能够以最优异的灵敏度定量分析最复杂和最具挑战性的样品。本实验旨在考查TSQ Quantiva 在复杂基质中针对目标肽段定量的灵敏度。

图1. 主动离子管控技术（AIM）示意图

实验条件

材料与方法

PIERCE Peptide Retention Time Calibration Mixture（货号: 88320），内含15 条不同疏水系数（Hydrophobicity Factor, HF）的重标肽段。采用5ng/μL E.coli 酶解产物进行逐级稀释，获得浓度为0.0005 fmol/ μL, 0.0025 fmol/ μL, 0.005 fmol/ μL, 0.05 fmol/μL, 0.5 fmol/ μL, 5 fmol/ μL, 50 fmol/ μL 的样品。实验中通过Pinpoint 1.3 软件进行离子对的选择（图2），每个母离子选择4 个子离子，其中1 个子离子作为定量离子，3 个子离子作为定性离子。最终建立了15 条目标肽段，共计60个离子对的SRM 方法，其中加粗部分为定量离子（表1）。