蛋白质印迹法条带多或位置不准确的原因和解决办法
可能原因 | 验证或解决办法 |
|---|---|
二抗的非特异性结合 | 增加一个对照：不加一抗，其他操作过程不变，即可验证背景是否有二抗系统来源。选择其他二抗（特异性更强的，只针对重链的） |
一抗的特异性不够 | 使用单克隆或者亲和纯化的抗体，保证抗体的特异性 |
蛋白质降解 | 使用新鲜制备的标本，并使用蛋白酶抑制剂 |
二聚体或多聚体存在 | 增加蛋白质变性过程及强度 |
抗体浓度过高 | 降低抗体（一抗、二抗）浓度，可以减少非特异性条带 |
蛋白质上样量过大 | 降低上样量 |
封闭剂中有聚集体 | 使用前过滤封闭试剂 |
HRP耦联二抗中有聚集体 | 过滤二抗试剂，去除聚集体 |
HRP含量过高 | 降低酶联二抗的浓度 |
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