常规血液分析标准化的进展及质量管理（二）
（六）、操作方法
1、RBC/PLT计数
1）取5μl混合均匀血液加入100μlPBS-BSA稀释液；
2）加5μl抗CD41和5μl抗CD61染色液，孵育15分钟；
3）加入4.85mlPBS-BSA稀释液，使最终稀释度为1:1000倍；
4）计数最少50000个细胞，至少1000个血小板。流速设置小于3000 /秒。若出现红细胞散射光信号，而又有血小板荧光，应考虑RBC-PLT重合误差可能。
采用Quadrant或Bitmap软件分析，推荐采用Bitmap软件分析。
2、RBC值测定
采用ICSH推荐半自动、单通道、电阻抗颗粒计数仪法计数红细胞。
（七）、血小板计数计算
根据流式细胞仪计数结果，可得出RBC/PLT比率（R）。
R=RBC/PLT；
PLT计数值=RBC计数值/R。
如RBC计数值= ；
PLT计数值= 。
实验研究表明，在357名健康人（包括不同性别和人种），R值为21.572 ±5.134。
（八）、重合误差
一旦试验设定最佳条件，就无需考虑重合误差。但是，在设置过程中，应考虑稀释 、流速等方面因素是否达到监测重合误差可能。
（九）、不精密度
标本中细胞数量决定了统计学计数的变异程度。其中Nplt为流式细胞仪计数的血小板数，Nrbc为流式细胞仪计数的红细胞数；由于流式细胞仪计数的红细胞数相当于总流式细 胞仪计数值（Ntotal），而Nplt=Nrbc/R，所以，按照上述研究表明，R平均值为20左右，Ntotal为50000，流式细胞 仪计数血小板的统计学精度就可达2%左右。实验同样也证明，血小板计数为 ，方法学精度为1.7-3%。
（十）、干扰
虽然单克隆抗体标记方法在大部分标本中是有效的，但也会产生干扰。
（十一）、评价
经法国、英国、美国、日本等11个实验室运用抗CD41和抗CD61染色方法 对血小板计数研究显示，该方法的实验室内精度和实验室间精度很好。该法可以替代原来颗粒计数法，适用于自动血液分析仪的校准，尤 其是血小板计数减少标本，测定结果的准确性很高。
二、血液学质量保证
对于临床实验室来说，其提供服务有3个目的：（1）实验室检查结果必须准确； （2）所进行实验对疾病诊断、疗效观察、普查或流行病学研究有价值；（3）实验室必须快速、有效、经济的提供结果。为了达到上述 目标，实验室从管理者到操作人员的工作都必须纳入质量保证体系中。
血液学实验室的质量保证计划由4部分组成，（1）内部质量控制；（2）外部质 量评价；（3）分析前和分析后控制和（4）标准化问题。
