梅毒螺旋体基因扩增检测的操作方法
选择47kDa膜抗原基因(tpp47基因)、39kDa碱性蛋白基因(bmp基因),TPF1蛋白基因或TYF1蛋白基因和TmpA基因等作为引物,向缓冲液中加入引物,在模板DNA存在下,经变性、退火和延伸即可合成产物DNA,经若干个这样的循环后,DNA即得到大量扩增。
1.变性
加热使模板DNA在高温(约94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链。
2.退火
使溶液温度逐渐降至50℃~60℃,模板DNA即可与引物按碱基配对原则互相结合。
3.延伸
再将溶液温度逐渐升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物的4种脱氧核苷酸,复制出互补DNA。
上述3步为一个循环,样本中的DNA量即可增加一倍,新形成的链又可为下一轮循环的模板。
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