尿海藻糖酶的测定方法
一、酶活性的测定
1. 原理
利用海藻糖酶水解一分子海藻糖生成两分子葡萄糖，然后测定生成的葡萄糖浓度作为海藻糖酶的活性浓度。
2. 步骤
将尿液标本0.5mL通过5mmol/LpH为6.2的磷酸盐缓冲液平衡的SephadexG-25柱，以除去内源性葡萄糖。收集含蛋白的部分，将体积调整到1.5ml。将洗脱下来的标本0.9mI。加上0.1mL 0.25mmol/L的海藻糖，混合后于37℃温育120min。生成的葡萄糖用POD-GOD方法测定，以每小时每升尿液中释放多少umol的葡萄糖量作为海藻糖酶的活性浓度。
3. 结果
IshiharaR等测定健康组尿海藻糖酶的活性是26.6±14”umol·h-1．gcreatinine-1。
二、酶含量的测定
1. 原理
利用抗海藻糖酶单克隆抗体的夹心ELISA方法检测酶蛋白的含量。
2. 步骤
国外报导用重组海藻糖酶和人工合成的海藻糖酶多肽片段制备出抗人海藻糖酶的单克隆抗体，然后经过包被、封闭等步骤，用夹心ELISA方法测定出酶蛋白的浓度。
3. 结果
IshiharaR等用ELISA法测定健康组尿海藻糖酶蛋白的浓度为466±343ng·gcreatinin-1。健康实验者的尿海藻糖酶活性和含量之间有正相关（p<0.01，r=0.15）。这些数值均无性别及年龄差异。
海藻糖酶在正常人尿液中的活性很低，而且尿液中该酶活性是否能反映真实酶浓度也不确定。急性肾衰患者尿液中存在75kDa和30kDa酶蛋白分子，30kDa酶蛋白分子也许是蛋白水解酶降解完整海藻糖酶的产物，尽管尿液中存在75kDa酶蛋白分子，该患者尿海藻糖酶活性并不升高，说明尿液中酶活性已丧失，由于经典测酶活性方法的影响因素多而且灵敏度和特异性均不及免疫学方法测酶质量。因此，尿海藻糖酶的定量测定优于传统的酶活性测定。
