ASTM F2149-01
细胞自动分析的标准试验方法.单细胞悬浮液计数和分级的电敏域法

Standard Test Method for Automated Analyses of Cells8212;the Electrical Sensing Zone Method of Enumerating and Sizing Single Cell Suspensions

被代替

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标准号

ASTM F2149-01

发布

2001年

发布单位

美国材料与试验协会

替代标准

ASTM F2149-01(2007)

当前最新

ASTM F2149-16

 

 

适用范围

1.1 该测试方法，只要了解其局限性，涵盖了大多数细胞类型的计数和尺寸分布的测量程序。该仪器允许用户选择细胞大小设置，因此，该测试方法不限于特定细胞类型。该方法适用于悬浮以及贴壁细胞培养 (1)。这是一种定量实验室方法，不适用于在线或现场使用。结果可以报告为每毫升细胞数或每体积分析的细胞悬浮液的细胞总数。计数和尺寸分布都可以用细胞微米直径或体积、飞升来表示。
1.2 常规分析组织工程医疗产品(2) 中常用的细胞。例如软骨细胞 (3)、成纤维细胞 (4) 和角质形成细胞 (5)。 Szabo 等人使用该方法测量胰岛数量和体积 (6)。此外，使用电传感区技术的仪器用于对放入中空纤维盒体外肝脏辅助系统中的猪肝细胞进行计数和大小分布分析。在本研究 (7) 和其他研究 (6、8) 中，与传统的手动方法（使用血细胞计数器在显微镜下进行视觉细胞计数）相比，自动电感应区方法明显得到验证，具有更高的准确度和精确度。该验证已在多种细胞类型中得到证实。此外，自动化程序快速、坚固且具有成本效益；它还最大限度地减少了手动技术中操作员之间固有的差异。
1.3 该仪器由多家公司制造；然而，所有的原理都是电阻抗。这种用于细胞计数和尺寸测定的测试方法基于对悬浮在导电液体中的细胞穿过小孔时产生的电阻变化的检测和测量（参见（图1））。当细胞悬浮在导电液体（例如磷酸盐缓冲盐水）中时，它们充当离散绝缘体。当细胞悬浮液通过一个小的圆柱形孔时，每个细胞的通过会改变位于孔两侧的两个浸没电极之间的电气路径的阻抗。每个细胞通过孔时都会产生适用于计数和尺寸测定的电脉冲。通过孔径的路径（在其中检测细胞）被称为“电子传感区”。该测试方法允许通过电子选择生成的脉冲，对非常窄的尺寸分布范围内的细胞进行选择性计数。虽然脉冲数表示细胞计数，但产生的电脉冲的幅度取决于细胞的体积。电极之间的基线电阻是由于孔径边界内的导电液体的电阻造成的。 “电子传感区域”内细胞的存在会增加导电通路的电阻，该电阻取决于细胞的体积。对孔径内细胞行为的分析表明，细胞产生的脉冲高度是最接近与细胞体积成正比的参数。
1.4 限制讨论如下：
1.4.1 巧合8212;有时，超过一个单个细胞同时穿过孔径。与两个单独的脉冲相反，仅生成单个较大脉冲。结果是细胞计数较低，细胞体积测量较高。重合频率是由仪器校正的细胞浓度的统计可预测函数。这称为重合校正（8）。通过使用相对较低的细胞……可以最大限度地减少这种现象，从而确保更高的结果准确性。

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