【求助】电镜观察中空膜上细胞的贴壁情况

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• aaby (2014-10-29 18:01:04)

  1．单纯固定液
  (1)4％中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。
  甲醛(40%)　100 ml
  无水磷酸氢二钠 6.5 g
  磷酸二氢钠　4.0g
  蒸馏水　900 ml
  (2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
  (3)4％的多聚甲醛：主要用于培养细胞的固定。

• 跳跳哈里 (2014-10-29 18:02:19)

  谢谢，我看到做扫描电镜前　：取出平板
  膜, PBS全面漂洗后,以2. 5%戊二醛固定过夜,常规方法制备
  电镜标本,在扫描电镜(AMRAYMODEL 1000B)下观察。
  就是不知道这个戊二醛用什么来溶解，还有放在配好的放哪里固定，直接把膜放进2. 5%戊二醛溶液中吗？常规的电镜标本怎么制备的
  本人新手，还望不吝赐教

• 小熊妮妮 (2014-10-29 18:05:59)

  1.
  取材：用
  0.1M
  磷酸缓冲液洗净（两次）
    
  2.
  固定：用
  2.5%
  戊二醛溶液室温于通风厨固定
  1
  小时。固定完后用
  0.1M
  磷酸缓冲液和蒸馏
  水充分洗净。
    
  3.
  脱水：
  洗净后用
  30
  ％，
  50
  ％，
  70
  ％，
  80
  ％，
  90
  ％，
  95
  ％，
  100
  ％，
  100
  ％乙醇逐渐上升脱水。
  每级各
  10
  分钟左右。
  
  4.
  干燥：进行自然干燥。
    
  5.
  喷镀：将已干燥好的样品用导电胶粘于金属的样台上，再一起置于真空喷镀仪真空罩中，
  进行喷镀金铂合金镀层。