BIOXL高致病性猪蓝耳病一步法凝胶RT-PCR诊断试剂
<p> （针对中国猪蓝耳病变异株检测）</p>
<p> 一，产品简介</p>
<p> 一步法突变型猪生殖与呼吸综合症病毒反转录PCR</p>
<p> 检测临床样本和环境样本</p>
<p> 包括48 个扩增反应所需的试剂48次/盒</p>
<p> 请在使用前通读操作手册</p>
<p> 二. 试剂盒组成</p>
<p> ￭ 25 管 扩增反应试剂球 (Reagent Sphere； 4oC 保存)</p>
<p> ￭ 2 x 520 μl PRRSV 扩增反应试剂球溶液 (Sphere Diluent； -20oC 保存)</p>
<p> ￭ 2 x 25 μl 阳性对照 (Positive control； -20oC 保存)</p>
<p> 三，保存条件</p>
<p> 试剂球需置干燥剂中保存在4oC，已融解的试剂球则需保存在零下20oC。其它试剂亦需保存在零下20oC。使用前在冰上溶解各试剂并充分混合，不要旋涡振荡含酶的扩增反应试剂。</p>
<p> 四. 操作程序</p>
<p> 扩增反应试剂的准备</p>
<p> 1. 计算所需的反应数量 (n)</p>
<p> 2. 需要溶解的试剂球 = 0.5 x n</p>
<p> 3. 每个试剂球需要 40 μl 试剂球溶液</p>
<p> 4. 在冰上溶解试剂，并轻轻扣击充分混合 (不要旋涡振荡含酶的试剂)</p>
<p> 反应的准备</p>
<p> 1. 实验中除从样本中获得的RNA 模板外，我们还建议设置阳性和阴性（水）对照</p>
<p> 2. 按照下表准备扩增反应试剂：</p>
<p> 反应组分 每个反应体积</p>
<p> 扩增反应试剂 20 μl</p>
<p> 样品RNA 5 μl</p>
<p> 总体积 25 μl</p>
<p> 注意:</p>
<p> ￭ 实验时 RNA 应放在冰上</p>
<p> ￭ 阳性对照建议加5 μl 试剂盒提供的阳性对照。</p>
<p> ￭ 建议PCR 过程中检测样本设置重复，以便得到可靠的实验结果</p>
<p> ￭ 为了验证阴性实验结果不是由于样本中存有PCR 抑制物而导致PCR 呈阴性反应，我们建议在测试样本中加1 μl 的阳性对照作为spiking 对照 (spiking control)，同时进行PCR 反应。</p>
<p> PCR 循环:</p>
<p> 1 个循环 42oC 30 分钟</p>
<p> 95oC 10 分钟</p>
<p> 40 个循环 95oC 30 秒</p>
<p> 53oC 45 秒</p>
<p> 72oC 30 秒</p>
<p> 五. 实验数据分析</p>
<p> PCR 的产物需要通过2%琼脂糖凝胶电泳检测。野生型PCR 产物的长度为330 b.p.相对于变种型PCR 产物的长度为240 b.p.</p>
<p> Spiking 对照</p>
<p> 阴性的实验结果有几个可能性：</p>
<p> 1. 样本中不存在目的片段；</p>
<p> 2. 样本中目的片段的量低于检测值；</p>
<p> 3. 样本中存有 PCR 抑制物。试剂盒中设计spiking 对照 (spiking control) 是为了确定没有发生PCR 抑制。</p>
<p> 如果样本中加了阳性对照以后得出阴性结果，说明样本中存在PCR 抑制物，那幺此次阴性的实验结果就不能作为正确的结果，需要重新开始样本核酸的提取和PCR 扩增。</p>
<p> 北京祥龙环宇生物技术有限公司</p>
<p> 北京市朝阳区朝阳路财满街财经中心9号楼1单元702室 邮编100025</p>
<p> 电话 010-65567512 传真010-65563420</p>
<p> 编辑：foodadmin</p>
