放射免疫法快速检测饲料中磺胺类药物(Sulfonamides，SAs)...
磺胺类药物(Sulfonamides，SAs)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物。通过任何途径摄入的磺胺类药物会在人体中蓄积，其残留能破坏人的造血系统，造成溶血性贫血症、粒细胞缺乏症、血小板减少症等。国际食品法典委员会
(CAC)和欧美等大多数国家规定食品和饲料中的磺胺类药物总量及磺胺二甲基嘧啶等单个磺胺类药物的含量不得超过0.1
mg/kg。磺胺类药物检测方法有许多种，包括气相色谱法、液相色谱法、薄层色谱法、酶联免疫分析法、电导光谱法、荧光法、分光光度法等。但是这些检测方法都存在处理过程繁琐、操作时间长及只能检测单种磺胺类药物的问题。
Charm
II放射免疫分析法是采用放射性受体竞争的原理快速检测药物残留的方法，此方法可检测磺胺类药物总量。这种检测方法已经为美国FDA所认可，近几年才引入中国。本实验参考Charm
公司的资料，对饲料中的磺胺类残留检测进行了研究，建立了饲料中的磺胺类残留的Charm II放射免疫分析方法。
一、材料与方法
（一）设备和材料
1、Charm II 6600/7600分析仪：美国Charm 公司生产；
2、IEC离心机；
3、研磨机；
4、涡旋混合器；
5、恒温孵育器：85+1℃ ；
6、闪烁液加液器；
7、50mL离心管；
8、硼硅玻璃试管及试管塞；
9、药片压杆。
（二）样品和试剂
1、基质：饲料；
2、试剂：磺胺类Charm II检测试剂盒、闪烁液（Optifluor）、多抗标准品、MSU缓冲液、缓冲溶液M，以上试剂均由美国Charm 公司提供。
3、萃取缓冲液：用分析纯盐酸配成的0.1 mol盐酸溶液和分析纯的甲醇，按1：1的比例混合配成。
4、磺胺类药物标准品：磺胺二甲基嘧啶（SM2）、磺胺甲基嘧啶（SM1）、磺胺喹I恶啉（SQ）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲氧嘧啶（SM）、磺胺间二甲氧哒嗪（SDM）、磺胺吡啶（SPD）、磺胺二甲异嘿唑（SIZ）、磺胺甲基异恶唑（SMZ）、磺胺嘧啶（SD）、磺胺苯吡唑（SPP）、磺胺甲氧哒嗪（SMP）、磺胺氯哒嗪（SCP）。四环素、氯霉素、氨苄青霉素、卡那霉素标准品。以上标准品由Sigma公司提供。
（三）方法
1、测试原理
测定的基础是竞争性受体免疫反应。用3H标记的磺胺二甲嘧啶(示踪剂)与样品中磺胺类药物竞争结合试剂(微生物细胞上的特异性受体)上的磺胺结合位点，当样品中残留有磺胺类药物时，残留物与受体上的结合位点结合，从而阻止了
H标记的磺胺类药物与结合剂位点的结合。样品中的磺胺类药物含量越高竞争的结合位点越多，3H标记磺胺二甲嘧啶的则越少，用Charm
II分析仪测定样品中的。3H含量的cpm(每分钟脉冲数)值，cpm值越低则样品中的磺胺类药物残留量越高。
2、提取步骤
（1）取100 g饲料磨碎，称取100g至离心管内。
（2）加入20 mL萃取缓冲液，加盖。置摇床上混合10 min。
（3）1750 g（IEC离心机3.3×1000r/min）离心10 min。
（4）吸出上层液用于测试。
3、测定步骤
（1）用药片压杆的平端，将白色药片压入一洁净的玻璃试管内。
（2）加300微升蒸馏水到试管内用涡旋混合器振荡10s至药片破碎。
（3）用加样器加5 mL缓冲溶液M到试管内。
（4）用加样器加0.2 mL样品萃取液到试管内。
（5）用笔的平端，压入粉红色药片。用振荡器振荡大约15s，使样品上下l5次。置85_+1 cC孵育器内，孵育3min。
（6）1750 g（IEC离心机3.3×1000r/min）离心3min。
（7）离心停止后立即取出试管，倒掉上层液，用棉签清除试管内残渍，不要接触沉淀物。
（8）加300微升蒸馏水到试管内，振荡使沉淀物完全破碎。
（9）加3 mL闪烁液到试管内涡旋混匀至试管内无不均一的云状物。
（10）试管放入Charm II 6600/7600分析仪内。
（11）按CharmII 6600/7600分析仪操作程序选项（检测控制点需预先设定并输入仪器），读3H项的epm值。
4、阳性结果的确定
样品的epm值小于控制点时，需要重新检测样品及同时测定一个阴性质控和一个阳性质控，以确定试剂和设备是否工作正常。
通常情况下：
（1）测试的阴性质控应该是阴性质控平均值~20％（每一试剂盒都会给出阴性质控平均值，平均值一般为运行3份阴性质控液的epm值的平均数）。
（2）测试的阳性质控应该小于控制点。如果重测样品的epm小于控制点且上述两条件符合，则判定样品阳性
