药物检测案例--吩噻嗪类药物及其制剂的质量检测
一、性状
盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪和奋乃静的性状描述见表1。
二、鉴别
(一)化学法
1.氧化剂显色反应吩噻嗪类药物的硫氮杂蒽母核中的硫为二价,易被不同氧化剂氧化为砜或亚砜类物质而显色。常用的氧化剂为硫酸、硝酸、过氧化氢,氧化呈色反应见表2。
2.与钯离子配合显色 吩噻嗪类药物的硫氮杂蒽母核中的硫与钯离子形成有色的配位化合物(红色),其氧化产物砜和亚砜无此反应,专属性强。
(二)光谱法
1.紫外一可见分光光度法 本类药物中的硫氮杂蒽母核为共轭三环的π系统,在紫外一可见光区有吸收,如盐酸氯丙嗪的盐酸溶液在254nm和306nm有最大吸收,奋乃静的甲醇溶液在258nm与313nm处有最大吸收,可用于药物的鉴别。
2.红外分光光度法原料药盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪和奋乃静,均可采用红外分光光度法进行鉴别,要求供试品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。
三、检查
(一)特殊杂质检查
吩噻嗪类药物在合成过程中由于副反应,以及在贮藏过程中由于结构中的硫易被氧化且遇光分解,均会产生特殊杂质。如盐酸异丙嗪中的特殊杂质主要为合成时产生的少量异构体杂质[N,N-二甲基-2-(10H-吩噻嗪-10-基)丙-1-胺]和贮藏过程中产生的降解产物。药典将这些杂质规定为有关物质的检查,采用高效液相色谱法控制其限量。
盐酸异丙嗪中有关物质的检查方法:避光操作。取本品,加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取1ml,置100ml量瓶中,用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀作为对照溶液。照高效液相色谱法试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以水(用冰醋酸调节pH至2.3)-甲醇(55:45)为流动相,检测波长为254nm。理论塔板数按盐酸异丙嗪峰计算不低于3000,盐酸异丙嗪峰与相对保留时间1.1～1.2的杂质峰的分离度应大于2.0。取对照溶液20μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%,再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的3倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰,各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)。
盐酸异丙嗪的硫氮杂蒽母核中的硫为二价,易被氧化,遇光不稳定,故其有关物质检查应避光操作,溶液也应临用前配制。杂质限量的计算如下:
式中,L为杂质限量;C对为对照品溶液浓度;V对为对照品溶液体积;C供为供试品溶液浓度;V供为供试品溶液体积。
(二)制剂检查
1.溶出度测定药典规定盐酸氯丙嗪片、酸异丙嗪片和奋乃静片均需检查溶出度。其中,盐酸氯丙嗪片采用紫外-可见分光光度法中的百分吸收系数法测定与计算其溶出量。
盐酸氯丙嗪片的溶出度测定方法:避光操作。取本品,照溶出度测定法(第一法),以水1000ml为溶出介质,转速为每分钟100转,依法操作,经30分钟时,取溶液10ml滤过,精密量取续滤液适量,用盐酸溶液(9→1000)定量稀释制成每1ml中含盐酸氯丙嗪5μg的溶液,摇匀,照紫外一可见分光光度法,在254nm的波长处测定吸光度,按C17H19CIN2S·HCl的吸收系数为915计算每片的溶出量。限度为标示量的70%,应符合规定。
2.含量均匀度测定在生产过程中,某些小剂量的剂型由于生产工艺或设备的原因,可引起含量不均匀。测定含量均匀度的目的在于控制每片(个)含量的均一性,以保证用药剂量的准确。药典规定了奋乃静片测定含量均匀度。
奋乃静片含量均匀度测定方法:避光操作。取本品1片,除去包衣后,置乳钵中,加水5滴,湿润后,研细,加溶剂(取乙醇500ml,加盐酸10ml,加水至1000ml,摇匀)适量,研磨均匀,用溶剂定量转移至50ml(2mg规格)或100ml(4mg规格)量瓶中,充分振摇使奋乃静溶解,用溶剂稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液1ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;另取奋乃静对照品,精密称定,用上述溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含4μg的溶液,作为对照品溶液。取上述两种溶液,照紫外-可见分光光度法,在255nm的波长处分别测定吸光度,计算含量,应符合规定。
含量均匀度检查需计算每片(个)以标示量为100的相对含量,故每片的含量按式计算:
式中,As为供试品溶液的吸光度;Ar为对照品的吸光度;Ds为供试品溶液的稀释倍数;Dr对照品溶液的稀释倍数;Vs为供试品溶液的定容体积;Vr为对照品溶液的定容体积;m,为对照品的称样量。
四、含量测定
吩噻嗪类药物的含量测定方法有非水溶液滴定法、外-可见分光光度法氧化还原滴定法、电化学法及色谱法等。下面仅介绍前两种方法。
(一)非水溶液滴定法
吩噻嗪类药物母核上10位侧链上的氮原子具有一定的碱性,可用非水溶液滴定法测定含量,即在非水介质中用高氯酸滴定。
盐酸氯丙嗪的含量测定方法:取本品约0.2g,精密称定,加冰醋酸10ml与醋酐溶解后,照电位滴定法,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于35.53mg的C17H19ClN2S·HCl。按干燥品计算含C17H19ClN2S·HCl不得少于99.0%。
盐酸氯丙嗪的含量按式计算:
式中,ms为供试品的称取量(g);V为供试品消耗滴定液体积(ml);V0为空白试验消耗滴定液体积(ml);T为滴定度(mg/ml);F为滴定液的校正因子。
(二)紫外可见分光光度法
吩噻嗪类药物在紫外区有吸收,可用紫外-可见分光光度法测定原料及其制剂的含量。如,盐酸氯丙嗪盐酸溶液在254nm的波长处有最大吸收,在306nm的波长处有次最大吸收,但其原料及其制剂的含量测定均选用254nm的波长。奋乃静溶液在255nm的波长处有最大吸收。通过测定最大吸收波长处的吸光度,再结合吸收系数法或者对照品比较法,可以测得其含量。
1.盐酸氯丙嗪片的含量测定方法 避光操作。取本品10片,除去包衣后,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于盐酸氯丙嗪10mg)置100ml量瓶中,加盐酸溶液(9→1000)70ml,振摇使盐酸氯丙嗪溶解,用同一溶剂稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置100ml量瓶中,加同一溶剂稀释至刻度,摇匀照紫外-可见分光光度法在254nm的波长处测定吸光度,按C17H19ClN2S·HCl的吸收系数为915计算,即得。本品含盐酸氯丙嗪(C17H19ClN2S·HCl)应为标示量的93.0%～107.0%。
2.奋乃静片的含量测定方法避光操作。取本品20片,除去包衣后,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于奋乃静10mg),置100ml量瓶中,加溶剂(取乙醇500ml,加盐酸10ml,加水至1000ml,摇匀)约70ml,充分振摇使奋乃静溶解,用溶剂稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置100ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;另取奋乃静对照品,精密称定,用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含5μg的溶液,作为对照品溶液。取上述两种溶液,照紫外-可见分光光度法,在255nm的波长处分别测定吸光度,计算,即得。本品含奋乃静(C21H26ClN3OS)应为标示量的93.0%～107.0%。
3.盐酸氯丙嗪注射液的含量测定方法避光操作。精密量取本品适量(约相当于盐酸氯丙嗪50mg),置200ml量瓶中,用盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,摇匀;精密量取2ml,置100ml量瓶中,用盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,摇匀,照紫外-可见分光光度法,在254nm的波长处测定吸光度,按C17H19ClN2S·HCl的吸收系数为915计算,即得。本品含盐酸氯丙嗪(C17H19ClN2S·HCl)应为标示量的95.0%～105.0%。
五、其他噻嗪类药物的质量检测
除上述介绍的药物外,《中国药典》还收载了其他吩噻嗪类药物,其检测项目与方法各异。
