药物检测案例--酰胺类药物及其制剂的质量检测

2021.12.22

一、性状

对乙酰氨基酚、盐酸利多卡因、盐酸布比卡因的性状描述见表1。

二、鉴别

(一)化学法

1.芳香第一反应对乙酰氨基酚结构中共有在的芳氨基,可在酸性条件下加热水解,水解产物可发生重氮化一偶合反应。

鉴别方法:取本品约0.1g,加稀盐酸5ml,置水浴中加热40分钟,放冷;取0.5ml,滴加亚硝酸钠试液5滴,摇匀,用水3ml稀释后,加碱性β一萘酚试液2m1,振摇,即显红色。

药典收载的对乙酰氨基酚及其片剂、嚼片、泡腾片、注射液、栓剂、胶囊剂、颗粒剂与滴剂均采用此法鉴别。盐酸利多卡因,盐酸布比卡因结构中虽然也有潜在的芳伯氨基,但因邻位的2个甲基的空间位阻效应,使其不易水解,故不能用此法鉴别。

2.三氯化铁反应对乙酰氨基酚结构中具有酚羟基,可与三氯化铁试液反应显蓝紫色。

鉴别方法:取本品的水溶液,加三氯化铁试液即显蓝紫色。

3.重金属离子反应盐酸利多卡因酸氨基上的氮可在碳酸钠试液中与铜离子配位,生成蓝紫色的配位化合物,溶于三氯甲烷后则呈黄色。

鉴别方法:取本品0.2g,加水20ml溶解后,取溶液2ml,加硫酸铜试液0.2ml与碳酸钠试液1ml,即显蓝紫色;加三氯甲烷2ml,振摇后放置,三氯甲烷层黄色。

4.氯化物的鉴别盐酸利多卡因和盐酸布比卡因均为盐酸盐,显氯化物的鉴别反应。

(二)光谱法

1.紫外-可见分光光度法本类药物中均有苯环,具有紫外吸收。药典收载的盐酸布比卡因采用此法鉴别。方法为:取本品,精密称定,按干燥品计算,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.40mg的溶液,照紫外-可见分光光度法测定,在263nm与271nm的波长处有最大吸收;吸光度分别为0.53～0.58与0.43~0.48。

2.红外分光光度法药典收载的对乙酰氨基酚、盐酸利多卡因、盐酸布比卡因、醋氨苯砜均采用此法鉴别,其红外光吸收图谱应与对照图谱一致。

三、检查

(一)对乙酰氨基酚中特殊杂质检查

由于对乙酰氨基酚的生产工艺路线较多,不同的生产工艺路线所带入的杂质也有不同,除可能引入一般杂质外,还可能引入中间体、副产物及分解产物等特殊杂质,如对氨基酚、对氯苯乙酰胺、邻乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等。药典采用HPLC法检查对氨基酚及有关物质和对氯苯乙酰胺。

1.对氨基酚及有关物质检查方法临用新制。取本品适量,精密称定,加溶剂[甲醇-水(4:6)]制成每1ml中约含20mg的溶液,作为供试品溶液;另取对氨基酚对照品和对乙酰氨基酚对照品适量,精密称定,加上述溶剂溶解并制成每1ml中约含对氨基酚1μg和对乙酰氨基酚20μg的混合溶液,作为对照品溶液。照药典附录VD高效液相色谱法试验。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠8.95g,磷酸二氢钠3.9g,加水溶解至1000ml,加10%四丁基氢氧化铵溶液12ml)-甲醇(90:10)为流动相;检测波长为245nm;柱温为40℃;理论板数按对乙酰氨基酚峰计算不低于2000,对氨基酚峰与对乙酰氨基酚峰的分离度应符合要求。取对照品溶液20μl,注人液相色谱仪,调节检测灵敏度,使对氨基酚色谱峰的峰高约为满量程的10%,再精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍;供试品溶液的色谱图中如有与对照品溶液中对氨基酚保留时间一致的色谱峰,按外标法以峰面积计算,含对氨基酚不得过0.005%;其他杂质峰面积均不得大于对照品溶液中对乙酰氨基酚的峰面积(0.1%)杂质总量不得过0.5%。

杂质对氨基酚的限量按式计算,其他各杂质的杂质限量按式计算,杂质总量按照面积归一化法计算。其中

2.对氯苯乙酰胺检查方法临用新制。取对氨基酚及有关物质项下的供试品溶液(即取本品适量精密称定,加溶剂[甲醇一水(4:6)]制成得每1ml中约含20mg的溶液)作为供试品溶液;另取对氯苯乙酰胺对照品和对乙酰氨基酚对照品适量,精密称定,加溶剂[甲醇一水(4:6)]溶解并制成每1ml中约含对氯苯乙酰胺1μg与对乙酰氨基酚20μg的混合溶液,作为对照品溶液照高效液相色谱法试验。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠8.95g,磷酸二氢钠3.9g,加水溶解至1000ml,加10%四丁基氢氧化铵12ml)-甲醇(60:40)为流动相;检测波长为245nm;柱温为40℃;理论板数按对乙酰氨基酚峰计算不低于2000,对氯苯乙酰胺峰与对乙酰氨基酚峰的分离度应符合要求。取对照品溶液20μl,注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使对氯苯乙酰胺色谱峰的峰高约为满量程的10%,精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;按外标法以峰面积计算,含对氯苯乙酰胺不得过0.005%。

(二)制剂检查

对乙酰氨基酚片、胶囊、颗粒剂需检查溶出度,对乙酰氨基酚片采用溶出度测定法(第一法),胶囊剂、颗粒剂采用溶出度测定法(第二法),以紫外-可见分光光度法测定溶出量。

对乙酰氨基酚胶囊的溶出度测定方法:取本品,照溶出度测定法(第二法)以稀盐酸24ml加水至1000ml为溶出介质,转速为每分钟50转,依法操作,经45分钟时,取溶液滤过,精密量取续滤液1ml,置50ml量瓶中,0.04%氢氧化钠溶液稀释至刻度,摇匀,照紫外-可见分光光度法,在257nm的波长处测定吸光度,按C₈H₉NO₂的吸收系数()为715计算每粒的溶出量。限度为标示量的80%,应符合规定。

每粒的溶出量按式计算

式中,A为供试品溶液的吸光度;D为供试品溶液的稀释倍数,50/1=50;V_介质为溶出介质的体积,1000ml;L为吸收池的光路长度;为吸收系数715。

四、含量测定

(一)非水滴定法

盐酸利多卡因的脂烃胺侧链中为叔胺氮,盐酸布比卡因侧链含哌啶环,均具有弱碱性,可采用非水滴定法测定含量。药典收载的盐酸布比卡因采用此方法测定含量。

(二)紫外一可见分光光度法

对乙酰氮基酚结构中含有苯环,其0.4%氢氧化钠溶液于257nm波长处有最大吸收,可用于原料及其制剂的含量测定。药典采用吸收系数法,测定对乙酰氨基酚原料、片剂、咀嚼片、栓剂、胶囊剂及颗粒剂的含量。

1.对乙酰氨基酚的含量测定

取本品约40mg,精密称定,置250ml量瓶中,加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后,加水至刻度,摇匀,精密量取5ml置100ml量瓶中,加0.4%氢氧化钠溶液10ml,加水至刻度,摇匀,依照分光光度法,在257nm波长处测定吸收度,按C₈H₉NO₂的吸收系数()为715计算,得。按干燥品计算,含C₈H₉NO₂应为98.0%-102.0%。

对乙酰氨基酚的含量按式计算

式中,A为供试品溶液的吸光度;D为供试品溶液的稀释倍数,100/5=20;V为定容体积,250ml;为吸收系数,715;L为吸收池的光路长度;m为供试品的称样量。

2.对乙酰氨基酚片的含量测定取本品10片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于对乙酰氨基酚40mg),置250ml量瓶中,加0.4%氢氧化钠溶液50ml与水50ml,振摇15分钟,加水至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置100ml量瓶中,加0.4%氢氧化钠溶液10ml,加水至刻度,摇匀,照紫外-可见分光光度法,在257nm的波长处测定吸光度,按C₈H₉NO₂的吸收系数()为715计算,即得。本品含对乙酰氨基酚(C₈H₉NO₂)应为标示量的95.0%～105.0%。