维生素B12的鉴别检查方法
鉴别
(1)取本品约1mg,加硫酸氢钾约50mg,置坩埚中,灼烧至熔融,放冷,加水3ml,煮沸使溶解,加酚酞指示液1,滴加氢氧化钠试液至显淡红色后,加醋酸钠0.5g、稀醋酸5ml与0.2‰1-亚硝基-2-萘酚-3,6-二磺酸钠溶液0.5ml,即红色或橙红色;加盐酸0.5ml,煮沸1分钟,颜色不消失。(2)取含量测定项下的供试品溶液,照紫外可见分光光法(通则0401)测定,在278nm、361nm与550nm的波长处最大吸收。361nm波长处的吸光度与278nm波长处的吸度的比值应为1.70~1.88。361nm波长处的吸光度与50nm波长处的吸光度的比值应为3.15~3.45。(3)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集449图)一致
检查
溶液的澄清度取本品20mg,加水10m1溶解后,溶液应澄清有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。避光操作,临用新制。供试品溶液取本品适量,加流动相溶解并稀释制成每lml中约含1mg的溶液。对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀系统适用性溶液取维生素B2约25mg,置25ml量瓶中,加水10ml使溶解,加0.1%氯胺T溶液5m与0.05mol/L盐酸溶液0.5ml,用水稀释至刻度,摇匀,放置5分钟,精密量取1ml,置10m1量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀灵敏度溶液精密量取对照溶液1ml,置10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇028mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH值至3.5)(26:74)为流动相;检测波长为361nm;进样体积10l。系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,应出现维生素B2峰与一个降解产物峰(相对保留时间约为1.4),二峰之间的分离度应大于2.5。灵敏度溶液色谱图中,主峰的信噪比应大于3。测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0%)假维生素B12取本品1.0mg,置分液漏斗中,加水20ml使溶解,加甲酚-四氯化碳(1:1)5ml,充分振摇1分钟;分取下层溶液,置另一分液漏斗中,加硫酸溶液(1→7)5ml,充分振摇,上层溶液应无色;如显色,与同体积的对照液[取高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)0.15ml,加水至250ml比较,不得更深干燥失重取本品约50mg,在105℃千燥至恒重,减失重量不得过12.0%(通则0831)
