食品检测--鱼类毒素的检验方法
1、试样的制备
样品装于密封内置常流水中急速解冻后取样。将样品剪碎后,用研钵充分磨碎,取10g 放入烧杯,加0.1%醋酸溶液25mL 沸水浴中不断搅拌,加热10min。冷却后,减压过滤将滤纸上的残渣用0.1%醋酸溶液反复洗净。滤液和洗液合在一起定容50mL。难于过滤的皮、肝脏、卵巢分别用0.1%醋酸溶液处理后,经3000r/min,10min离心沉淀取上清液用0.1%醋酸溶液定容至50mL。该提取液称作原试液,1mL 相当于内脏组织0.2g。
2、毒性测试
采用小白鼠试验法进行毒性测试。试验动物为出生后4周,体重19～21g 健康的 ICR 系雄性小白鼠。
(1)预备试验 分别向两只小白鼠的腹腔内注射原试液各1mL,以 s 为单位测定致死时间的平均值。根据河豚毒素致死一小白鼠单位换算表换算原试液1mL 中的毒量,再以该值配制稀释到小白鼠在10min 左右死亡的浓度,在本试验中使用0.1%醋酸水溶液作为稀释液,记录稀释度。
(2)正式试验 分别向2只小白鼠的腹腔内注射稀释后的试液各1mL,测定致死的时间。小白鼠在10min 左右死亡时,再加注1～3只小白鼠测定致死时间。同时用0.1%醋酸溶液1.0mL 注射两只20g 左右的小白鼠作阴性对照,并取1只不注射任何液体的正常小白鼠作空白观察。
3、毒力计算和表示
在该试验取得的3～5只小白鼠的致死时间也包括生存小白鼠,从短时间开始排列,求中间致死时间,从所得的中间致死时间,然后计算毒量(小白鼠单位:MU)。10g 内脏组织研磨物制成50mL毒素提取原试液,提取比是。求原检样1g 的 MU。1MU 表示对一只 ICR系体重20g 的雄性小白鼠腹腔注射后30min 内死亡的毒素剂量。
原检样1g 的毒力(MU/g)=中间致死时间试液的毒力×提取比×稀释倍数。
