高效液相色谱法检测家禽食用组织中乙酰胺苄酯残留量
一、原理
乙腈萃取,正己烷脱脂,无水硫酸钠脱水浓缩,正己烷-丙酮溶解残渣,固相萃取柱净化，甲醇洗脱高效液相色谱外标法。
二、试剂与材料
除另有规定外所有试剂均为分析纯水为GB/T 6682规定的一级水。
2.1 试剂
2.1.1乙腈(CH3CN)：色谱纯度。
2.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。
2.1.3正己烷(C6H14)。
2.1.4丙酮（CH 3 COCH 3）。
2.1.5无水硫酸钠(Na2SO4)。
2.2 标准品
乙氧酰胺苯甲酯：含量≥98.5％。
2.3 标准溶液的制备
标准储备液：取乙酰胺苄酯标准品约10mg精密称定置100ml量瓶中加适量甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀在4℃保存1周。
2.4材质：硅酸镁固相萃取柱：100mg/ml或等效物。
三、仪器和设备
3.1高性能液相色谱仪：配备紫外检测器。
3.2分析天平：灵敏度0.000 01 g和0.01 g。
3.3 匀浆机。
3.4离心机：4 000 r min。
3.5 旋转蒸发仪。
3.6涡流混合器：3000r/min。。
3.7 振荡器。
四、测定步骤
4.1 提取
在50 mL塞式离心管中，加入乙腈15 mL，无水硫酸钠10g，正己烷10 mL，旋涡混合1 min，振荡5 min，离心10 min取下层乙腈，放入鸡心瓶备用沉淀用乙腈15mL再萃取，与提取液在同一鸡心瓶中混合两次，旋转蒸发至近干，温度45°C..加入正己烷丙酮（9:1）5.0ml使其溶解，超声30s摇匀移入10ml离心管中，4000r/min离心10min，上清液即可使用。
4.2 净化
用甲醇5mL预洗硅酸镁固相萃取柱取上清液1.0ml，用正己烷3ml洗涤，压干。洗脱液用甲醇1.0mL洗脱，挤压后，通过0.45μm有机滤膜进行高效液相色谱测定。
4.3 标准曲线的制备
分别精密量取适量标准储备液用甲醇稀释至5.0、2.5、1.0、0.5、0.25、0.10、0.05μg/ml的标准溶液进行高效液相色谱它是在使用前准备好的。
4.4 测定
4.4.1 高效液相色谱仪参考条件
a）色谱柱：C18柱（250 m×4.6 mm，5μm）或等效柱。
b）流动相：乙腈-水（30:70）。
c)速度：1.0mL/min。
d）检测波长：270 nm。
e）进样量：10μl。
4.4.2 测定法
用单点或多点标定样品溶液及相应的浓度标准溶液，并按外标法计算峰面积。乙氧基苯甲酰胺甲酯在标准溶液和样品溶液中的响应值应在仪器检测的线性范围内在上述高效液相色谱条件下，标准溶液色谱图见附录A。
五、结果计算和表述
样品中乙酰胺苄基酯残留量按计算：
式中：
X样品中苯甲酸乙氧胺的残留量为每公斤μg/kg.
cs标准溶液中乙氧基乙酰胺苄基酯的浓度单位为纳克每毫升（ng/ml）；
苯甲酸乙氧胺在A样溶液中的峰面积；
标准溶液中乙氧基酰胺苄基酯的S峰面积；
V1样品提取液浓度后溶解的总体积接近干，单位为(ML)；
v 2波斯酸镁固相萃取柱备用液体积，单位为毫升（ml）；
V3洗脱液体积为毫升(ML)；
m试样的质量，单位为克（g）；
从计算结果中扣除空白值用重复性条件下两个独立测定结果的算术平均值表示并保留三位有效数字。
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