Vero 细胞在 WAVE 反应器中的微载体球转球放大（三）
图 3 和图 4 显示的是球转球前后 Vero 细胞在微载体上的生长情况，分别有接种前第一、第三和第五天细胞的形态。图 4 的上面三张小图显示了球转球实验 B2B #3 之前来自细胞工厂种子培养的细胞生长形态。这是典型的 Vero 细胞种子培养的生长情况。通常 90%以上的 Vero细胞会在接种 4 小时之内贴到微载体上并在 24 小时内进入对数生长期。从图 3 和图 4 中各次球转球实验之后 Vero 细胞在微载体上的生长情况，可以看到球转球实验之后细胞保持有良好的和种子细胞培养相似的生长形态。
图 3.球转球实验 B2B #1和B2B #2后 Vero细胞在微载体上的生长情况
图4.球转球实验B2B #3前后 Vero细胞在微载体上的生长情况
在细胞培养袋中进行的高倍率放大
我们通过两种方式尝试把球转球放大工艺的放大倍率提升到十倍。第一种是用 6 g/L 的微载体密度培养 Vero 细胞至 4x106/毫升左右的细胞密度。球转球以后以十倍的放大倍数（培养体积放大，微载体表面积放大，或者两者兼具）开始新一轮的培养。第二种是如上以 3g/L 的微载体密度培养，待细胞密度接近 3x106
时，进行球转球实验，并采用培养体积和微载体表面积均为十倍的放大倍率。为弥补起始细胞密度过低可能会带来的生长缓慢，我们尝试在球转球之后用较少的培养体积培养。待细胞数增长到一定程度时，再添补新的培养基到需要的体积。观察球转球前后的细胞生长情况。
B2B #4 采用第一种方式进行高倍率放大，即用 6g/L 的微载体密度培养 Vero细胞至细胞密度 4.3x106/毫升,培养体积为 2 升。用胰酶把 Vero 细胞从微载体上消化下来。取十分之一的细胞/微载体悬浮液接种到新的 2 升的培养体积中，微载体浓度为 6g/L,这样培养体积及微载体表面积的放大倍数均是十倍。作为平行比较试验，取十分之一的细胞/微载体悬浮液接种到另一个 2 升的培养体积中，微载体浓度 3 g/L,如此培养体积放大十倍，微载体表面积放大五倍。两个培养同时进行，观察细胞生长的情况。
图5.球转球实验B2B #4前后细胞生长曲线
图 5显示的是球转球实验B2B #4前后细胞生长曲线。有意思的是球转球以后的两个平行培养中细胞增长速度基本相似，虽然其微载体密度相差了一倍。它们比种子培养多用了 1-2 天达到相似的细胞密度。这应该是球转球之后培养的起始细胞密度相对较低所致，但细胞倍增速度并不低。球转球之后两个培养前四天的细胞倍增速度均是 0.57 d-1，而种子培养前四天的细胞倍增速度是 0.54 d-1。
图 6 显示的是球转球实验 B2B #4 前后 Vero 细胞在微载体上的生长情况。可以看到球转球之后的培养虽然起始细胞数较少，但细胞贴壁和存活情况仍然不错。在其后的几天中细胞生长的形态也很稳定和良好。虽然在最初几天看似细胞在微载体上分布不均匀，但细胞增殖正常并在其后几天迅速布满所有的微载体。
图6.球转球实验B2B #4前后 Vero细胞在微载体上的生长情况
