分离小鼠室管膜下区
实验概要
分离小鼠室管膜下区
主要试剂
DPBS
主要设备
6 cm细胞培养皿、医用镊、外科手术剪、不锈钢尖头医用镊、外科手术刀、体视显微镜
实验材料
小鼠：实验所选取的小鼠年龄大小由实验目的决定。如果需要胎鼠神经干细胞，一般选择E13.5 d或E14.5 d的胎鼠，其细胞增殖能力强，取材可取全脑；
如果需要成体神经干细胞，则选取2~3月龄的成体小鼠，从室管膜下区分离神经干细胞。
！注意：所有实验必须按照相关政府及机构制定的关于实验动物的规定执行。
实验步骤
（1）预冷DPBS。
（2）根据动物使用的相关规定用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开头皮，去除颅骨，剥离硬膜，将大脑暴露出来。
（3）将大脑转移到盛有10 mL预冷的DPBS的6 cm培养皿中。解剖操作需在显微镜下进行。
（4）在视交叉处做一个冠状切面，以分开前脑和中脑。
（5）沿中线将左右半球切开，在截面处可见海马区。
（6）将镊子插入海马区与皮层白质之间，小心地将它们分开，去除海马区。
！注意：侧壁位于海马区的正下方，当去除海马区时，注意不要将镊子插得太深以免伤害室管膜下区。
（7）由于室管膜下区后面有纹状体，此时，可以根据条纹直接看到脑室侧壁的轮廓。用剪刀绕一圈将室管膜下区呈香蕉状切下。
（8）用剪刀伸进室管膜下区和后面纹状体之间，小心地将组织剪下并分离出来。
（9）将剪下的室管膜下区组织放入冷的DPBS中，冰上放置。
！注意：尽可能地把室管膜下区切薄一些，避免混入纹状体组织。
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