DAN探针检测的技术原理
DNA 或 RNA 片段能识别特定序列基因的 DNA 片段,能与互补的核苷酸序列特异结合,这种用同位素或非同位素标记的单链 DNA 片段即为核酸探针。
核酸探针技术是将双链 DNA 经加热或碱处理,使碱基对间的氢链被破坏而变性,解开成两条互补的单链。它们在一定温度和中性盐溶液条件下,又可按 A-T、G-C 碱基配对的原则重新组合成双链为复性。这种重新组合只是在两股 DNA 是互补(同源)或部分互补(部分同源)的条件下才能实现。正是由于双链 DNA 的这种可解离与重新组合的性质,才可用一条已知的单链 DNA,用放射性同位素或其他方法标记后制备成核酸探针,与另一条固定在硝酸纤维素滤膜上的变性单链 DNA 进行杂交(另一条 DNA 链与核酸探针是配对碱基,称为靶),再用放射自显影或其他显色技术检测,以确定有无与探针 DNA(或 RNA)同源或部分同源的 DNA(或RNA)存在。因为探针只与靶病原体的 DNA 或 RNA 杂交,而不与标本中存在的其他 DNA 或 RNA 杂交。
核酸探针技术的原理是碱基配对。互补的两条核酸单链通过退火形成双链,这一过程称为核酸杂交。核酸探针是指带有标记物的已知序列的核酸片段,它能和与其互补的核酸序列杂交,形成双链,所以可用于待测核酸样品中特定基因序列的检测。每一种病原体都具有独特的核酸片段,通过分离和标记这些片段就可制备出探针,用于疾病的诊断等研究。
推荐
