数据非依赖采集DIA 解决方案(三)
图 9. 三步完成 DIA 方法编辑
典型 DIA 数据如图 10 所示,从色谱图上看 DIA 数据与传统 Shotgun 数据没有明显区别,只是每个循环的二级谱图数量固定,因此扫描点分布均匀。
图 10. 典型的 DIA 数据
图 11. 四步完成 msxDIA 方法编辑
2. msxDIA
Orbitrap 具有的独一无二的 msxDIA 方法设置同样简单易用,只多一步随机 Inclusion list 生成(图 11): (1) 在模板中将 DIA 模块拖入方法流程(若加入一级扫描,则在 DIA 模块前拖入 Full Mass 模块);(2) 以 2 x 10 m/z 为例,DIA 模块中的 MSX count 设为 2,窗口宽度设为 10 m/z ,即完成 2 x 10 m/z 模式参数设置;(3) 使用 Skyline 软件生成随机的 Inclusion list 表;(4) 将随机 Inclusion list 表导入方法的 Inclusion list 中,完成方法设置,即刻可以开始 msxDIA 数据采集。
典型 msxDIA 二级质谱图如图 12 所示,每张谱图包含 2 个(2 x 10 m/z 模式)或 5 个(5 x 4 m/z 模式)窗口的碎片信息,即一次扫描采集 2 个或 5 个窗口,分析效率显著提高,选择性也因窗口缩小而明显改善。
图 12. 典型的 msxDIA 二级质谱图
六、数据分析
DIA/SWATH 数据复杂、信息量庞大,因此,高效、可靠的数据解析和信息挖掘是 DIA/SWATH 分析的瓶颈。