采用ACQUITY Arc系统重现单克隆抗体分析方法（一）
简介
如今，许多畅销的生物制药都是蛋白质类药物。与合成小分子药物的受控化学工艺不同，生物制剂生产采用的是活细胞，因此更易出现变异。为了确保产品质量和安全性，生物制药的整个生命周期通常需要应用多项分析技术。离子交换色谱(IEX)是一项常用的电荷变体监测技术，它可以反映生物制药在发酵、纯化和制剂等不同生产阶段发生的各种变化。
ACQUITY Arc系统属于四元LC 产品组合系列，专为解决分析人员在整个产品测试过程中面临的结果一致性问题而设计。ACQUITY Arc系统采用了Arc Multi-flow path技术，可轻松重现传统的HPLC 方法(流路1)，或者将现有方法转换为性能更出色的UHPLC分离方法(流路2)。本应用纪要将重点展示如何轻松重现现有的单克隆抗体离子交换分离方法并获得可重现的结果。
实验
LC条件
液相系统统：配备2489紫外可见检测器ACQUITY Arc系统，流路1
配备四元泵和DAD检测器的Agilent 1100系列HPLC 系统
吸收波长：280 nm
采样速率：20 Hz
色谱柱：Dionex ProPac WCX-10 10 µm，4.0 mm x 250 mm 色谱柱
柱温：30 ℃
流动相A：0.02 M MES ，pH 6.0
流动相B：0.02 M MES ，0.4 M氯化钠，pH 6.0
样品：1 mg/mL 利妥昔单抗，溶解于含0.15 M氯化钠、0.025 M柠檬酸钠和0.06% (v/v)吐温80的溶液中，pH 6.5
样品温度： 5 ℃
进样体积： 40 µL
梯度
数据管理
Empower® 3 CDS软件，SR2
结果与讨论
ACQUITY Arc系统能够轻松重现现有的IEX-HPLC方法并且具有出色的重现性
一般而言，分析人员在药品的整个生命周期中都需要对电荷变体进行监测，执行严格的工艺控制。因此，无论采用何种仪器进行测试，分析人员都必须确定系统间的差异，以便确保产品质量。理想情况下，采用的任何系统都必须能够提供符合产品分析指导原则的一致结果。为了研究将阳离子交换方法从传统仪器转换至现代LC 平台的可行性，我们采用Agilent 1100 系列HPLC 系统分析了利妥昔单抗(一种单克隆抗体)，并将分析结果与ACQUITY Arc系统的分析结果进行了比较。所用方法选自USP药物标准集1，虽然该方法现已停用，但它仍是该制药行业的代表性方法。
我们未对上述方法进行任何修改，直接将其应用于Agilent 1100系列HPLC 系统和ACQUITY Arc系统(图1)。如图所示，两个系统的色谱性能几乎完全一致。如图1的插图所示，该方法在两个平台间转换时，成功保持了同样的选择性和分离度。表1列出了经过数据处理得到的主峰相对保留时间，以及其它酸性和碱性变体的相对保留时间。虽然分析物在两个系统上的保留时间之间存在一定差异，但值得注意的是，所有主要色谱峰的相对保留时间基本上是一致的。
我们可通过计算多个参数来确定分析方法是否符合系统适用性标准，分离度就是其中之一。根据USP药物标准集1的规定，利妥昔单抗主峰(MP)与赖氨酸变体峰(1B)的分离度不得小于1.5。5次进样后，Agilent 1100 系列HPLC 系统的平均分离度为1.95 ± 0.02，而ACQUITY Arc系统的平均分离度为2.09 ± 0.02，因此这两个系统均符合标准。要保证产品一致性，不仅需要系统之间具有重现性，确保同一仪器内的重现性也非常重要。图2展示了在ACQUITY Arc系统上采用上述方法条件，5次重复进样利妥昔单抗所得的叠加色谱图。在整个运行时间范围内，每张色谱图几乎完全重叠。插图中所示的放大色谱图进一步证实了该结论。
