采用ACQUITY Arc系统重现单克隆抗体分析方法（二）
图1. IEX 采集数据比较，使用A) Agilent 1100系列HPLC系统和B) ACQUITY Arc系统。插图显示了酸性和碱性变体的分离情况。利妥昔单抗主峰标示为MP。其它酸性(1A、2A、3A)和碱性(1B 、2B 、3B)残留物均进行了相应标示，并在表1中列出了各自的保留时间。
表1. 在Agilent 1100 系列HPLC 系统和ACQUITY Arc系统上进行IEX分析所得的保留时间比较。酸性和碱性组分的峰标示见图1。∆值表示两个系统的相对保留时间之间的差异。所有结果均为5次进样的平均值。
表2列出了对图2中的数据进行定量分析的结果，包括主峰、酸性变体和碱性变体的峰面积百分比，以及将这些值与Agilent 1100系列HPLC系统5次进样所得数据的比较情况。总体而言，两个系统获得的数据相当。两个系统所得的主峰、酸性变体和碱性变体的峰面积差异分别为0.53%、0.38%和0.90%。
图2. ACQUITY Arc系统5次进样的IEX色谱图的叠加图。先于主峰洗脱的所有峰均为酸性变体，而在主峰之后洗脱所有峰为碱性变体。从插图中我们总共可鉴定出3种酸性变体(1A、2A、3A)和3种碱性变体(1B 、2B 、3B)，表2列出了总酸性变体和总碱性变体的汇总结果。
表2. Agilent 1100系列HPLC系统和ACQUITY Arc系统采集所得的IEX数据定量比较结果。酸性变体和碱性变体包括先于主峰洗脱以及在主峰之后洗脱的所有物质。∆值表示两个系统所得峰面积的差异。所有结果均为5次进样的平均值。
结论
借助Arc Multi-flow path技术，用户可利用ACQUITY Arc系统模拟传统HPLC 方法或将分析方法更新为UHPLC分离方法。本应用纪要证实，IEX方法能够从Agilent 1100系列HPLC系统轻松转换至ACQUITY Arc系统(流路1)。在保持所有方法参数不变的前提下，我们获得了相对保留时间几乎完全一致的色谱图。此外，在ACQUITY Arc系统上进行5次重复进样所得的检测结果显示出了极高的重现性。
参考文献
1. U.S.Pharmacopeial Convention,http://www.usp.org/global/medicines-compendium (accessed March 2015).
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