分子克隆-蛋白表达实验指南（七）
目的基因表达
14．快速诱导表达
快速诱导目的是为检测该重组质粒在BL21中是否能被诱导表达重组蛋白，并确定在不同IPTG浓度蛋白诱导效率的差异。
5． 挑单克隆菌落于7ml含有相应抗生素LB培养液的50ml培养管中，37C振荡培养过夜（8-16h）。
6． 37C，1mM
IPTG终浓度诱导蛋白。取700ul过夜摇菌加入7ml含有相应抗生素LB培养液的50ml离心管中，于OD600＝0.4-0.6（1:100接种，37C培养时，细菌生长至OD600＝0.4-0.6约需2h）时加入终浓度为1mM的IPTG。
7． 诱导前在37C培养的菌液中取1ml未诱导的对照，按1ml菌液×OD600×100μl的比例(如1ml OD600为0.4的菌加40ul
buffer)加入2×上样缓冲液，混匀，-20℃保存或直接上样。
8． 根据蛋白分子量大小配置相应浓度的SDS-PAGE胶。（50KD蛋白10％或12％）
9． 诱导3-4h后收集菌液，取1ml样品，测OD600，10000rpm，1min离心去上清后加入相应体积的2×上样缓冲液，vortex。
10． 将收集的菌液在水中煮5min，上样10μl ，120V电压走浓缩胶，加电压至150V进入分离胶电泳，直到染料刚好走到胶底。
11．
取下胶，考马斯亮蓝染色至少30min（染液若是新配的，染20min就够了），脱色液脱色。若急需看到结果，可以将胶在500ml蒸馏水中煮沸两次即可看到条带。
注意：
a.记录诱导后菌液的OD600
b.SDS-PAGE结果确定蛋白诱导后，再进行低温小量蛋白表达
c.制备的两个重组表达载体可同时进行快速诱导
SDS-PAGE胶样品排列：
MarkerUII 37CUI’I’
Marker：低分子量蛋白marker，上样10ul
UI：未诱导菌液，上样10ul。任取37C和20C中一个
I：诱导后对照，上样10ul
UI’, I’代表GST等空载体转化的BL21未诱导和诱导后的对照
若表达载体是GST等大分子蛋白tag，则应做一个诱导空载体的对照。SDS-PAGE时取未诱导的空载体和诱导后的空载体一起上样（诱导温度37C，IPTG
1mM），以检测诱导体系是否成功。
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