质谱快速鉴定两例AIDS合并真菌性血流感染病例分析-1
获得性免疫缺陷综合征( AIDS)是由人免疫缺陷 病毒(HIV)引起的严重危害人类健康的传染病,以损伤免疫系统为主要特征,患者极易获得机会性感染, 而新型隐球菌、马尔尼菲蓝状菌等深部真菌的机会性 感染是AIDS患者死亡的主要原因之一[ 1]。新型隐球 菌最常引起的感染为隐球菌性脑膜炎,其发病隐匿、 病死率高。患者主要表现为难以忍受的头痛,伴发 热、恶心、呕吐,脑膜刺激征阳性等脑膜炎的症状与体 征[ 2]。隐球菌性脑膜炎在健康人群中很少发生,但在 AIDS患者中发病率较高。马尔尼菲蓝状菌是一种条 件性高致病性真菌,同时也是青霉菌属中唯一的双向 真菌,主要侵袭免疫低下的人群,尤其是AIDS患者。 其临床表现复杂多样且缺乏特异性,有文献报道, 85%的马尔尼菲蓝状菌感染发生于AIDS患者,已成 为AIDS临床诊断的指征性症状之一[ 3]。 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)是一种新型软电离生物质谱技术,通过检 测每种病原菌特征性的蛋白指纹图谱,并与数据库中 的图谱 库 进 行 比 对 即 可 鉴 定 出 待 测 病 原 菌。将 MALDI -TOF MS联合分离胶促凝管直接检测血培 养阳性瓶中的病原菌,可以极大地缩短检测时间[ 4], 为临床提供可靠的诊断依据。 本文通过回顾分析2例明确诊断的合并真菌感 染的AIDS病例,探讨质谱鉴定对AIDS患者合并真 菌感染诊断的临床价值。
1 病例资料
1. 1 一般资料 2018年9月常州市第一人民医院呼 吸科及血液科收治的2例合并真菌感染的 HIV患 者。病例1,男, 56岁,因“咳嗽伴乏力、纳差半月余” 入院。患者入院前1月无诱因出现阵发性咳嗽, 1周 前至当地医院就诊查胸片提示支气管炎,予“顺尔宁、 苏黄止咳胶囊”,症状无改善,后出现乏力、纳差进行 性加重。2 d前进食后呕吐少许胃内容物,于本院门 诊就诊并行相关检查。患者自述自起病来进食逐步 减少,体质量减轻约5 kg。患者神志清,精神萎,慢性 病面容。胸部CT示右肺下叶多发空腔性病变,多发 肺大疱伴感染,右肺下叶外基底段结节,右肺上叶后 段少许炎症,左肺多发纤维灶。病程中患者出现一次 发作性双眼上翻,持续数秒后好转;嗜睡,呼之睁眼, 颈部稍有抵抗。诊断为:肺部阴影:真菌感染可能;脑 炎(真菌性可能)。病例2,女, 39岁,因“发现锁骨上 淋巴结肿大2周余”入院。患者2周前无明显诱因发 现左侧锁骨上淋巴结酸痛肿大,伴有咳嗽、咳痰、发 热,并感全身乏力、头晕不适。患者病程中有晕厥1 次,约15 s后意识恢复。患者体温39 ℃,神志清,精 神萎。正电子发射计算机断层显像示多发淋巴结氟 代脱氧葡萄糖代谢增高,考虑淋巴瘤浸润;左上肺磨玻璃影结节氟代脱氧葡萄糖代谢增高;两肺局部轻度 炎症,右中肺微小结节。诊断为:淋巴结肿大待查、肺 部感染。
1. 2 MALDI -TOF MS鉴定 抽取5 mL阳性血培 养液注入分离胶促凝管,需氧瓶抽取的血培养液以 4 000 r /mi n离心10 mi n,厌氧瓶中抽取的培养液经 3 500 r /mi n离心7 mi n,分离待测病原菌。弃去分离 胶促凝管内上层液体,缓慢注入1 mL无菌蒸馏水将 待测菌沉淀混悬(不破坏促凝胶),将混悬液转移至无 菌1. 5 mL小 型 离 心 管 中,经13 000 r /mi n离 心 1 mi n。弃去上清液后重复洗涤一次,最后将离心后 管底的细菌混悬于1 mL无菌蒸馏水中待检。取 300 μL待测菌重悬液与900 μL无水乙醇混合,经13000 r /mi n离心1 mi n后弃去上清液,再经多次离心 以完全去除残留的无水乙醇,放置于空气中自然干 燥。加入70%甲酸30 μL使待测菌充分混匀,再加入 乙腈30 μL旋涡混匀,经13 000 r /mi n离心2 mi n,取 上清液用于 MALDI -TOF MS鉴定。取制备好的上 清液1 μL涂布于96孔金属靶板,室温干燥后在金属 靶板表面加入基质液α -氰4 -羟基肉桂酸1 μL,再次 室温干燥后进行检测。参数设置:线性,正离子,蛋白 峰谱m/z范围2~20 ×10 3,激光解析每孔100次。 应用B i o t ype r 3. 0统 进 行 数 据 库 比 对,得 出 鉴 定 结果。
1. 3 API 20 C板条鉴定 抽取血培养瓶中的培养液 进行纯培养,将分离到的菌落用无菌生理盐水配制成 2个麦氏单位待测菌悬液,取100 μL悬液至API CMed i um培养基中,混匀后加入鉴定板条, 28 ℃培养 72 h后进行结果判读。
