蛋白质染色实验
考马斯亮蓝染色
银染法
非氨盐银染法
快速银染法
| 实验方法原理 |
1. 凝胶中蛋白质的定位可用考马斯亮蓝染料染色或银染色。前者简便且快捷，而银染法具有相当高的灵敏度，能用于检出更少量的蛋白质。 2. 蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。 3. 考马斯亮蓝在酸性条件下为棕红色，其所含的疏水基团在酸性条件下雨蛋白质的疏水区具有亲和力，通过疏水作用与蛋白质相结合，形成蓝色的蛋白质染料复合物，在595nm处有最大吸光度，在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质染料复合物在595nm下的吸光度与蛋白质量成正比。 |
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| 实验材料 | 蛋白质 |
| 试剂、试剂盒 | 聚丙烯酰胺凝胶 固定液 染色液 脱色液 |
| 仪器、耗材 | 滤纸 培养箱 |
| 实验步骤 |
1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以3~5倍体积的固定液覆盖，在旋转摇床中缓慢揺动2 h。
2. 倾去固定液，以考马斯亮蓝染色液覆盖凝胶，并缓慢摇动4 h。 4. 倾去固定液，以脱色液覆盖凝胶，缓慢摇动2 h，倾去脱色液，再加入新脱色液同时至获得蓝色条带及干净的背景。凝胶可放置在乙酸或水中保存。
6. 另外，也可将凝胶放在两张Whatman 3MM 滤纸上，顶上盖上塑料保鲜膜。在常规的凝胶干燥机中于80℃干燥1~2 h。
展开 |
| 注意事项 |
1. 带手套并仅在通风橱中进行。 2. 由于氨银溶液干燥后会发生爆炸，应马上用大量水冲去。 3. 不可使用石英比色皿（染色不易洗掉） ，可用塑料或者玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑料比色皿决不可以用乙醇或丙酮长时间浸泡。
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