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SYPRO Ruby 荧光染色实验

2019.3.29

实验方法原理	到目前为止，在常用来检测经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后的蛋白质的方法中，SYPRORUBY 可能是最灵敏的突光染色方法了，它能检测出仅含 1?2ng 蛋白的条带。遗憾的是，如此微量的蛋白条带经染色后用肉眼却不可见，需要一个荧光扫描仪检测（SYPRORuby 的最大激发光和发射光的波长分别是 280nm 和 450nm/610nm)。蛋白含量约 50ng 的条带在紫外透射光的帮助下肉眼可见。本方案是由 GenomicSolution 提供的 SYPRORuby 染色方法改写而来。这种方法也与质谱兼容。关于荧光检测技术，包括成像装置和检测设备等，请详阅 Patton(2000)。
实验材料	单向凝胶电泳分离后的蛋白样品
试剂、试剂盒	甘油
仪器、耗材	铝箔荧光扫描仪塑料容器
实验步骤	1.电泳结束后，将凝胶置于盛有试剂 A 的塑料容器中，试剂 A 的量要足够覆盖整块凝胶。例如，一块典型的 mini 胶（8 cmXIOcm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的试剂 A。 2.室温下摇动凝胶 30 min。 3.弃去使用后的试剂 A，加入足够覆盖凝胶量的 SYPRORuby 染料，用铝箔遮盖好容器，室温下摇动凝胶 90 mm 至过夜。未使用过的 SYPRO Ruby 染料仅需染色约 2 h，突光扫描仪（MolecularDynamicsTyphoon8600 或类似产品）就能检测到 Ing 条带。若重复使用染料按步骤③染色 2 h，灵敏度将下降，只能检测到约 Sng 蛋白含量的条带。 4.弃去 SYPRO Ruby 染料（或者保存起来以备后用，见步骤③的注解）。 5.加人适量的试剂 B，室温下摇动 30~60 min。 6.将荧光扫描仪设置在 523nm 处对凝胶扫描，或者将凝胶保存在适量的 2% 甘油中。凝胶在 2% 甘油中可保存 6 个月，而且荧光信号不会减弱。 7.若要长期保存凝胶，应用干胶机或让凝胶在空气中干燥。若采用空气干燥凝胶，需将凝胶放在两张湿的玻璃纸中间，拉紧玻璃纸，待胶静置于空气中变干。空气干燥后的凝胶可永久保存展开