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生化分析仪器之自动进样器原理及注意事项

2018.8.09

自动进样器在生化分析仪器,色谱分析仪器中有着广泛应用,它的运行可靠性和精确性直接影响着分析结果。液相色谱系统大多使用自动进样器引入样品,正确使用自动进样器是保证液相色谱系统分离精确度的基本条件,用自动进样器注入适当体积的标准样品可为峰高和峰面积的测量提供小于1%的标准偏差。

对于液相色谱而言,无论是手动进样器或是自动进样器都是用六通阀进样的,只是自动进样的较手动进样器的死体积较大,多了计量泵和一部分联接管线。自动进样器可以减少体力劳动,增加样品处理量,提高日常工作精度。

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自动进样器原理图



HPLC进样方式

现在的色谱实验室,大都使用六通进样阀或自动进样器。进样装置要求:密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。HPLC进样方式可分为:隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。


1隔膜进样


用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内,可把样品直接送到柱头填充床的中心,死体积几乎等于零,可以获得最佳的柱效,且价格便宜,操作方便。但不能在高压下使用(如10MPA以上);此外隔膜容易吸附样品产生记忆效应,使进样重复性只能达到1~2%;加之能碉各种溶剂的橡皮不易找到,常规分析使用受到限制。


2停流进样


可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”;另一缺点是保留时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中,效果较好。


3阀进样


一般HPLC分析常用六通进样阀(以美国RHEODYNE公司的7725和7725I型最常见),其关键部件由圆形密封垫子(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积在存在,柱效率低于隔膜进样(约下降5~10%左右),但耐高压(35~40MPA),进样量准确,重复性好(0.5%),操作方便。

六通阀进样方式有部分装液法和完全装液法两种。①用部分装液法进样时,进样量应不大于定量环体积的50%(最多75%),并要求每次进样体积准确、相同。此法进样的准确度和重复性决定于注器取样的熟练程度,而且易产生由进样引起的峰展宽。②用完全装液法进样时,进样量应不小于定量环体积的 5~10倍9最少3倍),这样才能完全置换定量环内和流动相,消除管壁效应,确保进样的准确度及重复性。

六通阀使用和维护注意事项:①样品溶液进样前必须用0.45UM滤膜过滤,以减少微粒对进样阀的磨损。②转动阀芯时不能太慢,更不能停留在中间位置,否则流动相受阻,使泵内压力剧增,甚至超过泵的最大压力;转到进样位时,过高的压力将使柱头损坏。③为防止缓冲盐和样吕残留在进样阀中,每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗,或先用能溶解样品的溶剂冲洗,再用水冲洗。


4自动进样


用于大量样品的常规分析。


液相自动进样器做为客户使用来说最关注的问题是:

1,定量是不是准确。现在方法验证特别多,基本都是外标,所以进样准确那是必须滴。

2,定位准确。反复进样,一般半年左右是最考验仪器的时候,半年过去了还那么准确就说明是经的住考验的,还有就是如果瓶子的位置放错,放重了,或是没放,自动进样器应该有足够的应对出错,经过调整后能依然准确定位。

3,防残留设计。无论采用什么技术,必须最小的残留,这要在洗针设计上下足功夫。

4,价格。这个不多说。

5,进样速度。最简捷的进样,快速洗针也要求越来越高。

6,防光照设计。

7,易于是清理及擦拭设计。

8,配套其它部件的设计及价格。


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