酶法组织消化技术：从粗制的胶原酶到高纯度消化产品一
酶法组织消化中常用的胶原酶（Collagenase），能特异性地降解胞外胶原蛋白，使胶原蛋白和纤维粘连蛋白的网状结构解离，而不损坏细胞表面结构的完整性。由于细胞外基质的成分复杂，除胶原蛋白外，还含有弹性蛋白，糖蛋白等其他大分子结构。而且不同组织类型，不同物种来源，不同年龄的组织中胞外基质组份不同。所以商业化的胶原酶产品一般是梭状芽孢杆菌裂解液的粗提物，是胶原酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶混合物，能降解胶原蛋白和其他蛋白，及多糖等胞外大分子物质，适用于多种组织的消化应用。
但是对于不同实验研究中分离的特定组织，需要根据经验来选择合适的胶原酶产品，并对酶浓度、酶体积、酶作用时间进行摸索，才能找到最佳的消化方案。
罗氏胶原酶产品选择示例
罗氏胶原酶产品提取自溶组织梭状芽孢杆菌（Clostridium histolyticum），并根据不同的酶活和验证的功能应用分为Collagenase A/B/D/P/H五类产品。被广泛应用于各种组织中（如肺、心脏、肌肉、骨、脂肪组织、肝、肾、软骨、乳腺、胎盘、血管、脑组织和肿瘤组织等）单个细胞的分离。应用其获得的细胞产量、活度和细胞功能性均经过严格的产品质量控制和验证。
罗氏胶原酶分类 | 主要酶组分 | 建议的组织应用（根据文献中的产品引用） |
Collagenase A | 胶原酶I型，胶原酶II型，梭菌蛋白酶，胰酶，中性蛋白酶 常规的酶混合比率，中度酶活 | 卵母细胞 肺细胞 |
Collagenase B | 胶原酶I型，胶原酶II型，梭菌蛋白酶，胰酶，中性蛋白酶 中至高度胶原酶活性，较高的梭菌蛋白活性（>10U/mg） | 心肌细胞 软骨细胞 胚胎前驱细胞 |
Collagenase D | 胶原酶I型，胶原酶II型，梭菌蛋白酶，胰酶，中性蛋白酶 中至高度胶原酶活性，极低的胰酶活性（<0.2U/mg） | 淋巴细胞 树状细胞 |
Collagenase P | 高酶活胶原酶，梭菌蛋白酶，胰酶，中性蛋白酶 针对胰岛细胞分离的经验证产品 | 胰岛细胞 软骨细胞 T细胞 |
Collagenase H | 胶原酶I型，胶原酶II型，梭菌蛋白酶，胰酶，中性蛋白酶 针对肝细胞分离的经验证产品 | 肝细胞 成纤维细胞 脂肪 |
小贴士：
如果您的组织在酶消化分散的过程中，出现胶状粘连细胞，影响细胞的分散，很可能是由于破碎细胞中DNA释放至胞外而导致的粘连，可通过DNase的加入使粘连的细胞获得更好的分散。
由于Collagenase粗酶中还含有各种不同的蛋白酶，如其中的淀粉酶和脂肪酶也会消化细胞表面的蛋白，对细胞造成一定的损伤。另外，粗制的胶原酶无法在不同批次产品间保持质量和酶活的一致性。即使针对同一种组织，使用不同批次的胶原酶进行消化，您仍需要对酶浓度、酶体积和酶作用时间进行优化。
那么如何使您的组织消化实验事半功倍呢？
罗氏Dispase®系列产品
罗氏Dispase®能用于多种组织和器官的原代细胞制备，由于其温和的特性，在消化过程中对细胞造成的损伤极小，它还能用于细胞的次代培养，也可用于细胞悬液中的聚团消化解聚。Dispase®是一种纯化的中性蛋白酶，提取自多黏芽孢杆菌（Bacillus polymyxa），杜绝了支原体污染的可能性，在宽泛的pH和温度条件下具有良好的稳定性，因此在组织消化过程中的表现比胶原酶更加稳定。
罗氏Dispase®尤其在皮肤组织的表皮分离和上皮层细胞培养中获得了广泛的应用。Dispase®I与Dispase®II两者的差别在于纯度的不同，Dispase®I经过滤除菌，且每mg Dispase®I的纯度和酶活远高于Dispase®II。
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