三十五项淘汰临床检验项目、方法及替代实验(33)
关于淘汰血清钾四苯硼钠比浊测定法
关于淘汰血清钠比浊，比色测定法
淘汰血清钾四苯硼钠比浊测定法和血清钠比浊、比色测定法的理由及替代方法
淘汰的理由
一、为何要淘汰血清钾四苯硼钠比色法
过去有不少测定血清钾离子的化学方法，如比色法，滴定法，应用较多的是四苯硼钠试剂比浊法。该法因不需特殊设备，在国内基层应用较广泛。但多年实践证明，由于比浊法本身是一种不够准确的测定方法，本法的准确度和精密度都很差，不能满足临床的需要。此法存在的主要问题是：
四苯硼钠质量的不稳定将严重影响试验结果。不同牌号、不同规格、甚至不同批号的试剂，往往纯度不一，直接影响测值。
试剂加入的方法、次序和速度都能影响浊度。例如，直接吹入与按吸球的用力大小均能影响结果，不易控制。
用血清和去蛋白血滤液作比较，前者测值高于后者，里明显高于火焰光度法。
黄疸和乳糜血清的干扰更大。
病人服用的一些药物能干扰测定结果。
由于上述原因，本方法很不稳定，误差较大。血钾测定对临床有重要意义，且其正常范围狭窄，又多用于急诊检验，所以要求测定方法的准确性高，快速简便，重复性好。四苯硼钠比浊法显然不能满足这一要求，应于淘汰。
二、为何要淘汰血清钠比浊、比色测定法
国内测定血清钠的化学方法主要有醋酸铀镁比色法和焦性锑酸钾比浊法。
醋酸铀镁比色测定法是根据血清中的钠离子与醋酸铀镁试剂作用，生成醋酸铀镁钠沉淀的原理进行分离，再用醋酸将沉淀洗涤溶解为醋酸铀、醋酸镁和醋酸钠，然后用亚铁氰化钾与沉淀中溶解的醋酸铀作用，生成棕红色的亚铁氰化铀，与同样处理的标准液比较，求出血清钠浓度。另外一种快速法，用亚铁氰化钾直接与加入定量醋酸铀镁试剂的反应后，剩余的醋酸铀作用生成亚铁氰化铀，比色测定。
无论那一种方法都需要将钠离子沉淀完全，但因受具体实验条件的限制，很难确保做到这一点。在测定沉淀中的醋酸铀时需将沉淀物彻底洗涤，洗涤过程中难免有所丢失。快速法子求加入醋酸铀镁试剂量非常准确。两种方法都比较繁琐，测测定时的温度对结果亦有影响，难以保证结果的质量要求(CV<2％)。
血清钠的焦性锑酸钾比浊测定法是利用钠离子与焦性锑酸钾作用生成溶解度很低的焦性锑酸钠出现沉淀混浊的原理，并与同样处理的标准液进行比浊，测出钠浓度。焦性锑酸钠溶解度虽低，但仍需加入乙醇以使沉淀析出。测定时要求加乙醇时须用力冲入，使沉淀迅速形成并保证沉淀颗粒的均匀。因为沉淀颗粒大小与沉淀形成速度有关，而沉淀颗粒大小影响浊度结果，因此很难保证操作的重复性。测定的最后步骤加水的目的是使透光度增加，便于读数，但有可能导致沉淀溶解。反应液放置后沉淀颗粒变大，影响结果。由于以上原因，比浊法测定的精密度和准确度都难以保证临床的要求。
替 代 方 法
一、火焰光度法
（一）原理
样品中的钾、钠原子受火焰的热能被激发处于激发态。激发态的原子不稳定，迅速回到基态并释放能量，同时发射出元素特有波长的幅射谱线。利用此原理进行光谱分析。样品用去离子水稀释后，通过压缩空气雾化并与燃气混合燃烧，钾的火焰为深红色，波长为768nm；钠的火焰呈黄色，波长为589nm。通过相应波长的滤色片分离谱线，经光电管或光电池转换成电信号，与己知浓度标准液对比可计算血清中钾、钠的浓度。
（二）试剂
１、钾标准贮存液(钾10mmol儿)：精确称取经110℃烘烤4小时以上并置于干燥器至恒重的氯化钾(AR)0．7456g，用去离子水溶解后移入1L容量瓶中，再稀释至刻度。
２、钠标准贮存液(200mmol／L)：精确称取经110℃烘烤泄小时以上并置干燥器至恒重的氯化钠(AR)11．691g，用去离子水溶解后移入1L容量瓶中，再稀释至刻度。
３、钾钠混合标准应用液I(钾0．04mmol／L，钠1．2mmol／L)：取钾标准贮存液4ml、钠标准贮存液6ml于几：容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，贮存在塑料瓶中备用。
４、钾钠混合标准应用液Ⅱ(钾0．04mmol／L、钠1．4mmol／L)：取钾标准贮存液4ml和钠标准贮存液7ml于1L容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，贮存在塑料瓶中备用。
５、钾钠混合标准应用液Ⅲ(钾0。04mmol／L、钠l．5mmol／L)：取钾标准贮存液4ml和钠标准贮存液8ml于1L容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，贮存在塑料瓶中备用。
（三）仪器
不同厂家生产的仪器虽然型号不同，但主机(包括空气压缩机)基本上由三个部分组成：
１、雾化燃烧部分：压缩空气经气阀调节恒压输入，到达喷咀的同时，将测定液通过吸样管吸入，在雾化室内进行雾佻，然后按一定比例与燃烧气体混合到达燃烧器，点火燃烧。
２、光学部分：燃烧的火焰即为光源，通过反光镜和聚光愿缉成的导光系统，最后通过干涉滤光片，钾滤光片为繁8nm，钠滤光片为589nm。
３、光度测量部分：通过滤光片的光束射到光电管或光电池，使光能转变为电能，经放大器放大后，在电流表或数字显上读出结果。
（四）操作
１、标本准备：血标本必须及时分离血清，吸出血清，用去离子水进行1：100(或根据具体仪器的说明书推荐的稀释度)稀释。作尿钾、钠测定时，将24小时尿液标本充分混合，吸出尿液用去离子水进行适当稀释。如属于内标法测定的仪器，要用指定浓度的锂溶液进行稀释。经稀释的标本置火焰光度计的样品吸入管吸入进行测定。
２、仪器准备：不同型号的火焰光度计的操作步骤可有差异。应严格按照仪器说明书进行操作。根据测定方法不同火焰光度计可分为直接测定型和内标准测定型两大类。
用直接测定型仪器测定时，首先配制不同浓度的钾钠混合标准应用液(参照试剂部分)及稀释标本分别测量发射光强度，记下读数。以浓度为横坐标，检流计读数为纵坐标分别绘制钾、钠标准曲线。根据标本的读数从标准曲线上查得标本中钾、钠含量。
血清钾的参考值为3．5～5．3mmol／L。如标本作1：100稀释时，通常测定浓度在0．03～0．06mmol／L的范围，标准曲线呈直线并通过原点，可用单一标准液。血清钠的参考值为135～145mmol／L。通常测定浓度范围为1．2—1．6mmol／L，标本作1：100稀释时，在此范围内的标准曲线，多数不通过零点，故测定血清钠时不应使用单一标准液，至少应用三个含不同浓度的钠标准液，浓度可分别为1．2mmol／L、1．4retool／L及L
１．6mmol／L(均含钾0．04mmol／L)，使测定标本读数在高、低标准液读数之间，按下列公式计算结果：
测定标本读数－低标准液读数
钠mmol/L={[------------------------------
高标准液读数－低标准液读数
×(高标准液浓度mmol/L－低标准液浓度mmol/L)＋低标准液浓度 mmol/L]}×稀释倍数
使用内标准法测定钾钠的火焰光度计时，要用含锂的稀挪稀释标本，这类仪器多数能直接显示测定结果。内标准测征法减少了由于雾化速度和火焰温度的波动而引起的误差，句提高测定的精密度和准确度，优于直接测定(外标准)法。
（五）附注
１、血标本应及时分离血清，尽快测定，不可用溶血标本。岩不能立即测定，应及时将血清置于具塞试管内冰箱保存。如标本溶血，应在报告单上注明。
２、尿钾、钠浓度差异范围很大，应调整稀释倍数。使尿钾的浓度在10mmol／L以内，尿钠的浓度在标准应用液的范围内。
３、内标测定法用含锂(硝酸锂或氯化锂)的溶液作稀释液，配制后应立即置聚乙烯瓶内保存，不可放在玻璃试剂瓶内，以免锂离子进入硼硅玻璃中而使其浓度降低。
４、测定用的玻璃器皿必须用去离子水冲洗干净，不得有任何污染。
５、仪器的各种管道应保持通畅，不能有堵塞，燃气及助燃气的气压及比例应保持恒定。
６、每批测定应用定值质控血清进行监控，若误差超过允许范围，应及时查打原因。
二、离子选择性电极(1SE)法
（一）原理
当溶液标本中被测离子与电极接触时，在离子选择性电极膜基质的含水层内发生离子迁移，迁移离子的电荷改变存在着的电势，使膜面间的电位发生变化，在测量电极与参比电极间产生一个电位差，此种电位差应符合能斯特(Nernst)方程：
RT
E＝E0+-----log10α(χ)
ZF
E：测得的电位。E0：标准电极电位(常数)。R：气体常数。T：绝对温度。F：法拉第常数。Z：离子价。α(χ)：离子的活度。
测得的电极电位和“х”离子的活度的对数成比例。当活度系数值定时，电极电位与离子浓度(C)的对数也成比例，以此求出离子的活度或浓度。
用离子选择性电极测定钾钠的方法有两种：一种是直接电位法，一种是间接电位法。
１、直接电位法
血清、血浆或全血标本不经稀释直接进入ISE管道作电位分析。因为ISE只对标本中的水相活化离子选择性地产生响应，而与标本中脂肪、蛋白质所占的体积无关，故文献报告直接电位法比间接电位法的钾、钠浓度结果约高2～4％。一般认为，直接电位法更能真实反映代表生理意义的血浆水中离子的活度。严重的高血脂和高蛋白血症的标本由于每单位体积血清中水量明显减少，如用间接电位法或火焰光度法测定，标本经稀释后再测定，可能出现假性低血钾、低血钠。有的直接电位法ISE仪器，为了测定结果能与传统的火焰光度法一致，设有血清水钾钠数值与火焰光度法数值的校正计算程序。在选用这个程序时，如标本中血清蛋白与脂荚含量正常，直接电位法与火焰光度法数值基本一致，如为高皿脂、高蛋白或低蛋白标本，则二者结果将不符合。
直接电位法测定的血清钾钠结果表示血清水钾钠的活度：（mmol／L）。
２、间接电位法
标本与标准液用指定离子强度与pH的释液按仪器说明书规定的比例稀释，再送入电极管道进行电位测量，标本与标准液的离子强度和pH接近，间接电位法结果与火焰光度法基本一致，表示稀释后测定溶液中的离子活度，以mmol／L报告结果。
（二）操作
各种型号ISE分析仪的试剂配方、试剂用量、操作方法有所不同，一般操作如下：
１、开启仪器、清洗管道。
２、用适合本仪器的低、高值校准液进行两点校准，通过校准后方可应用。
３、直接电位法，可将样品直接吸入电极管道进行测定。间接电位法，样品由仪器自动稀释后再行测定。
４、结果由微处理机处理并打印。
５、测定完毕后，清洗电极和管道后再关机。
（三）附注
避免血液标本溶血及血清凝块。冰箱保存的血清标本俊置室温后再行测定，否则结果偏低。
关机后不要立即再次开机，需稍待2～3分钟再开机，驭防缩短电极使用寿命。
用校准液校准后，每日应用定值质控血清进行监控。
按仪器说明书规定，定期作校准，以保证结果准确。
钾钠离子选择电极测定仪中的钠电极的电极膜多采用罐酸锂铝玻璃膜制成，寿命较长。钾电极的电极膜多采用缬氨霉素膜制成，有规定的使用寿命，需按期更换。
