乳酶生的鉴别检查方法
鉴别
(1)牛奶凝固力取本品0.3g,加至20ml牛奶培养基(取新鲜牛奶或市售纯牛奶,分装至100mnl离心管,于4~8℃,以每分钟5000转离心5~10分钟,去除上层脂肪层;或取新鲜牛奶置沸水浴中煮30分钟,于2~10℃放置18小时以上,使乳脂析出,取脱脂溶液。将制备好的脱脂牛奶分装于试管中,每管20ml,于115℃湿热灭菌20分钟。或取脱脂奶粉,制成10%~15%的溶液,分装,于115℃湿热灭菌20分钟)中,摇匀,作为供试品管,取2管平行试验;另取牛奶培养基20ml作为对照管,在37℃培养48小时(必要时延长至72小时)。对照管牛奶应无凝固现象,供试品管牛奶应凝固(2)染色镜检自含量测定项下计数平皿中,选取具有透明圈的3~5个菌落涂片,革兰染色,镜检。应为阳性球菌,菌体呈单个、短链或成对排列(3)运动性检查自含量测定项下计数平皿中,选取具有透明圈的不同形态菌落各2个,分别接种于含量测定项下的含糖牛肉汤培养基中,置37℃培养24小时,取培养物,以悬滴法观察。应无运动性。(4)酸度取鉴别(3)项下含糖牛肉汤培养物适量,接种于鉴别(1)项下牛奶培养基20ml中,作为供试品管;另取牛奶培养基20ml,作为对照管。分别置37℃培养48小时,取供试品管和对照管培养物各5ml,分别加水20ml和酚酞指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显淡红色,并保持1分钟不褪。两者消耗氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)毫升数的差值,应不小于2ml。(5)乳酸鉴别取鉴别(4)项下供试品管和对照管的培养物各1ml,分别加10%硫酸溶液3~5滴,振摇,加乙醚约10ml,强力振摇,放置数分钟,取上层乙醚液,置水浴中,蒸去乙醚,残渣加水2ml,摇匀,各取0.2ml,分别加硫酸2ml,摇匀,置水浴中加热2分钟,取出,立刻用冷水冷却,分别滴加10%愈创木酚的乙醇溶液1滴,振摇。对照管应显橙色,供试品管应显红色(6)生化反应自含量测定项下计数平皿中,挑取具有透明圈的菌落适量分别接种于山梨醇、L阿拉伯糖、甘露醇、D棉子生化管(取牛肉膏5g、蛋白胨5g、酵母浸膏5g、聚山梨酯805ml、琼脂1.5g与1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1.4m,加蒸馏水溶解并稀释至1000ml,按0.5%加入所需糖类或醇类,分装小试管,115℃湿热灭菌20分钟)中,置37℃培养24~48小时。山梨醇、D棉子糖反应呈阴性,L阿拉伯糖、甘露醇反应呈阳性。
检查
千燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,减失量不得过5.0%(通则0831)。杂菌取本品,照微生态活菌制品总论项下的方法检查ˉ《中国药典》三部),非致病性杂菌数测定采用磷酸盐缓冲液营养琼脂培养基[每1000ml营养琼脂培养基(胨10.0g,氯化5.0g,牛肉浸出粉3.0g,琼脂14.0g,水1000ml,取上述成分混合,微温溶解,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,调节pH值吏灭菌后为7.2士0.2)中,加入磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二訥7.23g,溶解,混匀,分装,121℃湿热灭菌20分钟]。除屎肠求菌外,1g供试品中含非致病菌性杂菌数不得过500cfu,含菌数不得过100cfu,不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门菌和志贺菌
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