胸腺法新的鉴别检查方法
鉴别
(1)取本品约2mg,加水1ml溶解后,加碱性酒石酸铜试液1ml,即显蓝紫色。(2)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
检查
氨基酸比值取本品适量,加盐酸溶液(1→2),于110℃水解24小时后,照适宜的氨基酸分析方法测定。以门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸的摩尔数总和除以19作为1,计算各氨基酸的相对比值,应符合以下规定:门冬氨酸3.4~4.6,谷氨酸5.4~6.6,丝氨酸2.4~3.6,苏氨酸2.4~3.6,丙氨酸2.7~3.3,缬氨酸2.4~3.6,亮氨酸0.8~1.2,异亮氨酸0.8~1.2,赖氨酸3.4~4.6溶液的澄清度与颜色取本品适量,加0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)(取磷酸二氢钾2.72g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液116.4m溶解,用水稀释至1000ml)溶解并稀释制成每1ml中含1.6mg的溶液,依法检查(通则0901第一法和通则0902第一法),溶液应澄清无色。如显浑浊,与1号浊度标准液比较,不得更浓。醋酸取本品适量,精密称定,加稀释液[0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇(95:5)]溶解并定量稀释制成每1ml中含2.0mg的溶液,作为供试品溶液。照合成多肽中的醋酸测定法(通则0872)测定,含醋酸不得过5.0%有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品适量,加0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)溶解并稀释制成每1ml中含胸腺法新0.5mg的溶液对照溶液精密量取供试品溶液2ml,置100m量瓶中,用上述缓冲液稀释至刻度,摇匀。系统适用性溶液取胸腺法新对照品与杂质I对照品各适量,加0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)溶解并稀释制成每1ml中含胸腺法新0.5mg与杂质I50gg的混合溶液。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以硫酸铵缓冲液(取硫酸铵26.4g,磷酸25ml加水溶解并稀释至2000ml)-乙腈(90:10)为流动相A,以硫酸铵缓冲液乙腈(50:50)为流动相B;按下表进行梯度洗脱;柱温为50℃;检测波长为210nm;进样体积20l。时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)05080226088系统适用性要求调节洗脱梯度表45分钟处的流动相的比例使胸腺法新的保留时间约为30分钟。系统适用性溶液色谱图中,理论板数按胸腺法新峰计算不低于2000,杂质1峰与胸腺法新峰之间的分离度应大于1.2测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,除溶剂峰和醋酸峰外,单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(2.0%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(4.0%),小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰忽略不计水分取本品,照水分测定法(通则0832第一法)测定含水分不得过5.0%。
