三十五项淘汰临床检验项目、方法及替代实验(16)
五、血清游离甲状腺激素(FT3、FT4)测定
(一)原理
T4由甲状腺分泌进入血循环，绝大部分立即与血浆蛋白相结合。血循环中的T3一部分来自甲状腺，大部分由T4在血循环中脱碘转换而成。游离型T3(FT3)和游离型T4(FT4仅分别占总T3、T4的0.4％及0.04％。但只有游离型甲状腺激素进入靶器官细胞内发挥生理作用，并且不受TBG浓度变化的影响。因此，血清FT3、FT4的浓度能最直接和较正确地反映甲状腺功能状态。
(二)性能?
1．TBG正常时，FT3、FT4的性能基本同TT3、TT4，但FT3、FT4诊断准确率高于TT3、TT4，是诊断亚临床甲亢和亚I临床甲低的灵敏指标。
2．由于血清FT3、FT4测定结果不受TBG浓度变化的影响，在家族性TBG增高症，妊娠；服用雌激素和避孕药等致TBG容量增加，以及在家族性TBG减少症，低蛋白血症，服用雄激素和糖类皮质激素等致TBG容量减少的情况下，是反映甲状腺功能的正确指标。
(三)血清FT4测定的操作方法
按试剂盒的说明书进行操作；现以一种常用的固相RIA试剂盒为例说明：
1．试剂盒组成
(1)游离T4抗体——包被试管：100支T4抗体包被聚丙烯包被试管，包装在拉锁袋中。冷存，防潮。打开后要仔细重新封好。从制作日期开始，在2—8℃可稳定至少一年。颜色为浅黄色。
(2)[125I]游离T4：一瓶碘标记T4冻干粉，每瓶加110ml蒸馏水重新配制。静置10分钟，然后翻转混匀。重新配制后在2—8℃保存可稳定至少30天或到瓶上标明的有效期内。
(3)游离T4标准品；一套七瓶游离T4标准品冻干粉A至G。至少於使用前30分钟向零标准品中加入2.0ml蒸馏水，其余B至G各加入1.0ml蒸馏水，用移液管轻轻混匀。重新配制后在2—8℃冷存，可稳定至少30天。
标准品浓度分别为0、0.1、0.5、1. 3、2.2、4.8和10ng／d1。
2．分析步骤
(1)空白管：成对标号4支空白(未包被)12X 75mm聚丙稀试管，用于T(总计数)和NSB(非特异结合)。
包被管：成对标号14支游离T4抗体—包被试管：A(最大结合)，B至G。成对标号其他抗体—包被试管用于质控和病人样品
(2）向NSB和A管中加入50μl零标准品A，向其他试管加入50μl相应的标准品、质控和病人样品。
（3)向每支试管加入1.0ml[125I])游离T4，振荡。
(4)37℃水浴温育1小时。
(5)完全倾去溶液。
(6)在丫计数器上计数1分钟。
3．结果计算
为了从logit-log坐标曲线上计算游离T4浓度，首先计算每对试管1分钟平均计数，然后计算每对试管相对於最大结合(MB)的百分结合率，A管的百分结合率为100％。
净计数
百分结合率＝－－－－－－－－×100％
净MB计数
使用logit-log坐标纸。以百分结合率为纵坐标，以游离T4浓度为横坐标，对B至G标准品的实验结果作图，标准曲线应为近似连结6点的直线。未知样品的游离T4浓度可以通过内插法从该直线估算。
4．参考值
0.8——2.0ng／d1。
(四)血清FT3测定操作方法。
按试剂盒的说明书进行操作。现以一种常用的固相RIA试剂盒为例说明：
1．试剂盒组成
(1)游离T3抗体一包被试管：100支T3抗体包被聚丙烯包被试管，包装在拉锁袋中。冷存，防潮。打开后要仔细重新封好。从制作日期开始，在2—8℃可稳定至少一年。颜色为l蓝色
(2) [125I]游离T3：一瓶碘标记T3冻干粉，每瓶加入110ml蒸馏水重新配制。静置10分钟，然后翻转混匀。重新配制后在2—8℃保存可稳定至少30天，或到瓶上标明的有效期内。
(3)游离T3标准品：一套游离T3标准品冻干粉七瓶：A至G。至少使用前於30分钟向零标准品A中加入2.0ml蒸馏水，其余B至G加1．0ml蒸馏水重新配制，用移液管轻轻混匀。重新配制后在2—8℃冷存，可稳定至少30天。
标准品浓度分别为0、0．5、1．6、3．5、7．0、21和42pg／m1。
2．分析步骤
(1)空白管，成对标号4支空白(未包被)12X75mm聚丙烯试管，用于T(总计数)和NSB(非特异结合)。
包被管：成对标号14支游离T3抗体—包被试管：A(最大结合)，B至G。成对标号其他抗体—包被试管用于质控和病人样品的检测。
(2)向NSB和A管中加入100μ1零标准品A，向其他试管加入100μ1相应的标准品、质控和病人样品。
(3)向每支试管中加入1.0mli[125I]游离T3振荡。
(4)在37℃水浴温育1小时。
(5)完全倾去溶液。
(6)在丫数器上计数1分钟。
3．结果计算
参照血清FT4固相RIA法
4．参考值
1.4——4.4pg／m1。
