药物检测技术--对氨基苯甲酸酯类药物及其制剂
一、性状
盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因和苯佐卡因的性状描述见表1。
二、鉴别
(一)化学法
1.芳香第一胺类的鉴别反应 盐酸普鲁卡因、苯佐卡因分子结构中具有芳伯氨基,可发生重氮化-偶合反应,即在酸性溶液中与亚硝酸钠发生重氮化反应,生成重氮盐,再与碱性β-萘酚偶合产生橙黄到猩红色偶氮化合物。方法为:取供试品50mg,加稀盐酸1ml,必要时缓缓煮沸,使溶解,放冷,加0.1mol/L亚硝酸钠溶液数滴,再加碱性β-萘酚试液数滴,生成橙黄到猩红色沉淀。
2.水解产物反应 盐酸普鲁卡因、苯佐卡因分子结构中具有酯键,容易水解。利用水解产物的性质可进行鉴别。
盐酸普鲁卡因鉴别方法:取本品约0.1g,加水2ml溶解后,加10%氢氧化钠溶液1ml,即生成白色沉淀;加热,变为油状物;继续加热,发生的蒸气能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色;热至油状物消失后,放冷,加盐酸酸化,即析出白色沉淀。
苯佐卡因与强碱液共沸,发生水解反应,生成乙醇及对氨基苯甲酸盐。乙醇遇碘试第八章典型药物及其制剂的质量检测液并受热发生碘仿反应,即生成黄色沉淀,并有碘仿的臭气。药典采用此方法鉴别苯佐卡因。
3.测定衍生物的熔点 盐酸丁卡因含有叔胺氮原子,可与硫氰酸铵生成沉淀,其熔点约为131℃。方法为:取本品约0.1g,加5%醋酸钠溶液10ml溶解后,加25%硫氰酸铵溶液1ml,即析出白色结晶;滤过,结晶用水洗涤,在80℃干燥,依法测定。
(二)光谱法
药典采用红外分光光度法鉴别盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因及苯佐卡因原料药,要求待测药物的红外吸收光谱应与对照图谱一致。
三、检查
主要讨论特殊杂质的检查。盐酸普鲁卡因分子结构中有酯键,其水溶液易发生水解反应。盐酸普鲁卡因注射液在制备过程中受灭菌温度、时间、溶液pH值、贮藏时间以及光线和金属离子等因素的影响,可发生水解反应,生成对氨基苯甲酸和2-二乙氨基乙醇。其中对氨基苯甲酸随贮藏时间的延长或高温加热,可脱羧、氧化为有色物,使注射液变黄,不仅疗效下降,而且毒性增加。故药典采用HPLC法的外标法检查盐酸普鲁卡因及其注射液中的杂质对氨基苯甲酸。
盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查方法:取本品,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液,作为供试品溶液另取对氨基苯甲酸对照品,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中含1μg的溶液作为对照品溶液;取供试品溶液lml与对照品溶液9ml混合均匀,作为系统适用性试验溶液。照高效液相色谱法试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(68:32)为流动相;检测波长为279nm取系统适用性试验溶液10μl,注入液相色谱仪,理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000,盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0。取对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分峰高约为满量程的20%。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致的色谱峰,按外标法以峰面积计算,不得过0.5%
四、含量测定
(一)亚硝酸钠滴定法
盐酸普鲁卡因、苯佐卡因具有芳伯氨基,在盐酸存在下能与亚硝酸钠定量地发生重氮化反应,生成重氮盐。因此,药典采用亚硝酸钠滴定法测定盐酸普鲁卡因、注射用盐酸普鲁卡因、苯佐卡因的含量。
盐酸普鲁卡因的含量测定方法:取本品约0.6g,精密称定,照永停滴定法,在15～25℃,用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于7.28mg的C13H20N2O2。
(二)非水溶液酸碱滴定法
药典采用乙醇作为溶剂的非水溶液酸碱滴定法,定盐酸丁卡因的含量。方法为:取本品约0.25g,精密称定,加乙醇50ml振摇使溶解,加0.01mol/L盐酸溶液5ml,摇匀,照电位滴定法,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定,两个突跃点体积的差作为滴定体积。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于30.08mg的C15H24N2O2·HCl。
(三)紫外分光光度法
本类药物中含有共轭体系,具有紫外吸收,可用于含量测定。药典采用紫外分光光度法测定注射用盐酸丁卡因的含量。方法为:取本品10瓶,分别加水溶解,并分别定量转移至250ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;另取盐酸丁卡因对照品,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液,作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各3ml,分别置于100ml量瓶中,加盐酸溶液(1→200)5ml与磷酸盐缓冲液(pH6.0)(取磷酸氢二钾20g与磷酸二氢钾80g,加水溶解并稀释至1000ml,6mol/L的氢氧化钾溶液调节pH至6.0)10ml,用水稀释至刻度,摇匀,照紫外-可见分光光度法,在310nm的波长处分别测定吸光度,计算每瓶的含量,求出平均含量,即得。每瓶中盐酸丁卡因的含量按式计算:
式中,As为供试品溶液的吸光度;Ar为对照品溶液的吸光度;Cr为对照品溶液的浓度;V为定容体积(250ml);D为供试品溶液稀释倍数(D=1);Vs为供试液10瓶的体积(ml)。
(四)高效液相色谱法
药典采用HPLC法测定盐酸普鲁卡因注射液的含量。方法如下。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(68:32)为流动相;检测波长为290nm,理论板数按盐酸普鲁卡因峰计算不低于2000。盐酸普鲁卡因峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
测定法 精密量取本品适量,用水定量稀释制成每1ml中含盐酸普鲁卡因0.02mg的溶液,作为供试品溶液,精密量取10μl注入高效液相色谱仪,记录色谱图;另取盐酸普鲁卡因对照品,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中含盐酸普鲁卡因0.02mg的溶液,同法测定。按外标法以峰面积计算,即得。
