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荧光分光光度计的原理是什么

2020.3.13

很多用户对于荧光分光光度计的原理不是很了解,为了让大家对荧光分光光度计的原理有一个深刻的了解,上海旦鼎技术人员特意为您提供了以下资料。并为您区别荧光分光光度计与紫外分光光度计的不同之处。

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一、荧光分光光度计原理

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。

物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态,这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光。

不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。

在溶液中,当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似,荧光分析通常也采用标准曲线法进行。

荧光分光光度计原理图 

二、荧光分光光度计与紫外分光光度计的区别

两种仪器的原理完全不同。

1、荧光分光光度计由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。

2、紫外分光光度计是根据朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)光吸收的基本定律,即物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量。

通俗的说,荧光分光光度计是测样品中物质被激发出了光能量,紫外分光光度计是测样品中物质吸收了光能量,原理完全不同。

 


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