分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

轻松实现液相色谱的方法转换（一）

2020.3.08

图1. 从Agilent 1200系列LC系统到Agilent 1290 Infinity LC系统的方法转换。

本文对Agilent 1290 Infinity液相色谱系统用于测定盐酸胃复安药物制剂中的杂质和有关物质的性能进行了评价。1200系列HPLC系统上的常规LC方法很容易转换为Agilent 1290 Infinity LC系统上的超高压方法，温度精确调节是使不同杂质得到相同选择性的关键参数。在此方法开发过程中施加的压力高达1070 bar。最终的高效方法在880 bar下操作，分析时间为3.5min，比原来的HPLC方法快4倍左右，且具有同样的准确度。

目前药物分析的关键词是高通量、高效率和高分离度。高效率的目标就是在所开发和验证方法的准确度、精密度和重现性保持不变的前提下，开发比当前所用方法约快4~5倍的分析方法。在液相色谱（LC）中，加快分析速度的方法包括使用填料粒度小于2μm的色谱柱和/或在高温下操作。采用填料粒度小于2μm的色谱柱，与常规方法相比，可以在更高的线性流速下操作，但需要专用的LC仪器。

我们用Agilent 1290 Infinity LC系统测定了盐酸胃复安制剂中的杂质。该系统配置了高压泵，输液压力高达1200 bar，以及新的快速而灵敏的二极管阵列检测器（DAD）。方法开发包括从配置填充3.5μm 填料色谱柱的常规仪器（1200系列LC系统），向配置1.7μm填料色谱柱的UHPLC系统（1290 Infinity LC系统）上的条件转换。通过比较两个系统得到的数据，对各系统准确度、精密度和重现性进行了评价。

图2. 摩擦热的生成对色谱柱选择性的影响以及降低柱温的效果。

实验部分

仪器、试剂与材料

标准1200系列HPLC系统和1290 Infinity LC系统。

试剂与材料

杂质和有关物质的储备溶液用甲醇配制,储备溶液与水混合并稀释成适当浓度。制剂是盐酸胃复安水溶液（5mg/ml）与某些其它物质（保密配方）混合制成的注射剂。

图3. 用最终的Agilent 1290 Infinity LC系统方法得到的结果。

结果与讨论

LC与1290 Infinity LC系统的方法转换

原来的方法是在使用四元泵带线性分离的1200系列HPLC上开发的。制剂添加了0.5%w/w的色谱图如图1A所示。使用的色谱柱是XBridge C-18柱，填充3.5μm粒度填料，初始压力为140 bar。只要将某些仪器的差异考虑进去，该方法可以轻松转换到1290 Infinity LC系统上。如果将方法参数直接拷贝到1290 Infinity LC系统上，保留时间将明显缩短。由于两个系统的延迟体积不同，选择性也发生了改变。四元泵的延迟体积是950μl，而1290 Infinity 二元泵的延迟体积已减少到了10 μl。我们在1290 Infinity LC 方法中引入了一段初始等梯度持续时间来补偿这一差异。经过这种直接修正，两个系统的保留时间和选择性非常相似，而1290 Infinity LC 的效率比1200 系列更高（未显示色谱图）。