细胞膜糖类电镜显示实验
实验方法原理
细胞膜糖类包括糖蛋白和糖脂,其显示技术较常用的是凝集素细胞化学技术,此外,还有钌红染色法等。
钌红染色法的原理是钌红可以与羧基(酸性基)通过静电结合,电镜下呈电子密度高染色。
实验材料 组织样品
试剂、试剂盒 钌红原液戊二醛 二甲胂酸钠缓冲液锇酸
实验步骤
1. 钌红原液配制
钌红溶于双蒸水,浓度为 10 mg/ml,60℃,振荡 10 min,3000 r/min 离心约 15 min,取上清冷藏保存。
2. 前固定液 3% 戊二醛 2.5 ml,0.2 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH 7.3)2.5 ml,钌红原液 2.5 ml 顺序混合。
3. 后固定液 2% 锇酸 2.5 ml,0.2 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH 7.3)2.5 ml,钌红原液 2.5 ml 顺序混合。
4. 标本切小(1 mm3),置于前固定液中室温 1 h。
5. 0.1 mol/L二甲胂酸钠缓冲液漂洗3次,每次 3 min。
6. 1% 锇酸后固定液中室温固定 2 h。
7. 漂洗、脱水、包埋同常规。
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