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使用透射电镜观察细胞核仁,取材时应注意哪些问题

2022.7.15

织从生物活体取下以后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部各种酶的作用，出现细胞自溶现象。此外，还可能由于污染，微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此，为了使细胞结构尽可能保持生前状态，必须做到快、小、准、冷：

(1)．动作迅速，组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2.5%戊二醛固定液。
(2)．所取组织的体积要小，一般不超过1mm×1mm×1mm。也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形。因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。
(3)．机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。
(4)．操作最好在低温(0℃～4℃)下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。
(5)．取材部位要准确。

取材方法：将取出的组织放在洁净的蜡版上，滴一滴预冷的固定液，用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小，然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果组织带有较多的血液和组织液，应先用固定液洗几遍，然后再切成小块固定。

①快速：　　为了保持生物材料的活体状态，减少“死后”超微结构变化，样品离体后应在1分钟内浸入预冷固定液中。
　　②块小：　　组织块体积一般在0.5-1mm3。由于固定液渗透速率缓慢，渗透深度较浅，若组织块过大，样品中心部位将得不到良好固定。对于较难一次性取的较小的组织，可适当取大一点的组织，先投入预冷的4%多聚甲醛中固定30min，随后取出切成小块，放入戊二醛固定液中继续低温固定。
　　③部位准：　肾脏、胰岛、脑垂体等不同部位有不同组织结构，应根据研究目的和要求确定切取部位。为了电镜观察的准确性，取材部位必须要准确，而且，不同实验组的标本尽量取在相同部位（如心肌组织取左心室，则一律取左心室），否则，将无法比较，进而影响观察结果，最终导致电镜观察失败。
　　④损伤小：　取材用器械应锋利，取材时应避免牵拉、挤压，防止组织受机械损伤。
　　⑤低温：　　为了抑制酶的活性，减少组织自溶，取材最好在低温条件下进行。取下样品所浸泡的固定液也要保持在0～4℃，组织块修切时要在冷固定液中进行。

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使用透射电镜观察细胞核仁,取材时应注意哪些问题

周锦帆