荧光抗体技术检测基本原理
荧光抗体技术检测基本原理
某些荧光物质在一定条件下．羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒既能与抗原或抗体结合。又不影响抗原与抗体的特异性结合。用荧光抗原或荧光抗体对待检标本染色后，在荧光显微镜下观察，可看到发出荧光的抗原抗体复合物。作为蛋白质标记用的荧光物质需具备如下条件：①有与蛋白质分子形成稳定共价键的化学基团，但不形成有害产物；②荧光效率高，与蛋白质结合的需要量少；③结合物在一般条件下稳定，结合后又不影响免疫活性；④作为组织学标记，结合物的荧光必须与组织的自发荧光有良好的反衬；⑤结合程序简单，能制成直接应用的商品。满足这些要求的荧光物质有硫氰酸荧光素(FITC)、四乙基罗丹明(RB20())和四异甲基罗丹明(TMRITC)等，其中应用zui广的是异硫氰酸荧光素。荧光抗体(抗原)染色法有以下几类：
1．羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒直接法 直接滴加2～4个单位的标记抗体于标本区，置试盒中．于37℃染色30min，然后置大量pH7．O～7．2的磷酸缓冲液(PBS)中漂洗15min，干燥．封载即可镜检。
2．双层法标本先滴加朱标记的抗血清．置湿盒内。37℃30min。漂洗后，再用标记的抗抗体染色37℃30min．漂洗、干燥、封载。
3．夹层法本法主要用于检测组织中的Ig。标本先用相应的可溶性抗原处理，漂洗后再用与该检Ig有共同特异性标记抗体染色。
4．抗补体染色法用荧光标记抗补体抗体，即可用以示踪能进行补体结合的任何抗原抗体系统。将已灭活的抗血清与1：10稀释血清混合．滴加于标本上，37℃30～60min，漂洗后．羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒再用抗补体染色37℃30min，漂洗、干燥、封载、镜检。
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