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简介高效液相色谱仪分离单元的配置选型

2022.2.13

  分离单元(高效液相色谱柱)

  色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件。

  色谱法最核心的机制就是把样品中各个组分进行有效分离,而实现分离靠的就是色谱柱。

  色谱柱选择时需要考虑四大参数:固定相类型(填料种类)、柱长、柱内径、填料粒度。

  固定相类型:目前主要有硅胶基质的ODS(碳十八)、氨基、氰基、苯基、硅胶等色谱柱,以及高分子聚合物的固定相填料。目前ODS(碳十八)应用最为广泛,高效液相色谱法大约有80%分离采用的就是ODS(碳十八)填料。

  柱长:色谱柱的长度越长,分离效果越好,但是背压也就越大、柱子价格就会越贵。目前柱长应用较多的是375px、500px、625px这三个长度,尤其以625px最多。

  柱内径:其它几个柱参数不变的情况下,高效液相色谱柱的内径越小,分离度越好(分离度越高),但是柱负载量越小。常用柱内径是3.9mm、4.6mm、6.0mm,尤其以4.6mm为最常用。

  填料粒径:根据色谱法的速率理论,填料粒径越小,分离效果越好;但是填料粒度越小,在同样的流动相输送流速下,对于高效色谱仪高压泵的背压也就越大,对于高压泵的加压能力、密封性能也就要求越高。高效液相色谱仪一般采用3微米、5微米或10微米的填料粒径,而3微米以下粒径的填料,通常应用于超高效液相色谱仪。高效液相色谱法应用最多的是5微米粒径的填料。

  分离单元还有另外两个问题需要掂量:是否需要配预柱(保护柱)、是否需要配柱温箱。

  预柱(保护柱):预柱(保护柱)的存在,会加大色谱死体积,会降低柱效,所以除非样品特别脏、或有特别多的高分子物质会堵塞分析柱,否则尽量不用预柱(保护柱)。

  柱温箱:因为高效液相色谱法对于温度的些微波动并不特别敏感,除了一些对于柱温稳定性要求特别高的分离,高效液相色谱法很多情况下并不需要配置柱温箱。当然,如果采购预算足够多,安装柱温箱确实能有更好的色谱出峰时间重复性。

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