化学发光免疫分析的分类及特点
化学发光免疫分析
(ChemiLuminescence ImmunoAssay, CLIA)
一、定义：
化学发光是一种特异的化学反应，有机分子吸收化学能后发生能级跃迁，产生一种高能级的电子激发态不稳定的中间体，当其返回到基态而发出光子，即为化学发光。将化学发光与抗原抗体相结合而形成的免疫分析技术，即为化学发光免疫分析。
二、分类：
根据发光原理的不同，主要可分为化学发光免疫分析（CLIA）和化学发光酶免疫分析（CLEIA）两种。
CLIA | CLEIA | |
原理 | 用化学发光物质直接标记抗原或抗体 | 在酶免疫分析完成后加入化学发光底物，产生化学发光 |
发光类型 | 闪光型 | 辉光型 |
标记物 | 吖啶酯（acrydinum esters） | 1．辣根过氧化物酶(HRP)/H2O2/Luminol系统；2．碱性磷酸酶(AP)/1，2二氧乙烷稳定衍生物（AMPPD）系统 |
发光时间 | 零点几秒到几秒 | 几分钟到几小时 |
测量仪器 | 全自动化加样及测量仪 | 通用型仪器 |
另外，最近建立了一种偶合放大化学发光酶联免疫分析法（ECLIA），尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H2O2反应体系产生化学发光，但由于该体系的检测灵敏度不够高，不能满足酶联免疫测定的要求。因此，为了提高体系的检测灵敏度，可将HRP催化H2O2氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H2O2的化学发光反应相偶合。
三、优点：
1.灵敏度高：其灵敏度可达10-16mol/L（RIA为10-12mol/L）。又如化学发光底物（如AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍。
2.宽的线性动力学范围：发光强度在4～6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（OD值）为2.0的范围相比，优势明显。虽然RIA也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用。
3.光信号持续时间长：辉光型的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天，简化了实验操作及测量。
4.分析方法简便快速：绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式。
5.结果稳定、误差小：样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。
6.安全性好及使用期长：在上述优点前提下，更免除了使用放射性物质。
四、现状：
CLIA是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析，是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛，已占各种免疫分析的首位，应用领域涉及肿瘤标记物、激素、机体免疫功能、传染性疾病、酶、脂肪酸、维生素和药物等多种检测项目。
目前已有若干国际知名公司的CLIA系列产品及配套仪器进入我国，但试剂与仪器的价格都很贵，不适应在我国广泛的普及和应用。目前我国的CLIA产品基本尚属空白。因此，我国亟待研究开发符合国内条件及需求并在国内有竞争力的CLIA系列产品，使我国的免疫分析能尽快赶上当今世界范围内免疫分析发展的趋势和步伐。
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