凝胶色谱净化液相同位素稀释质谱法测定肉中的甲奈威
摘要：采用液相色谱-串联质谱检测技术结合同位素稀释定量方法，建立了肉中甲奈威残留量测定方法。样品经丙酮和石油醚提取，凝胶色谱(GPC)净化，经HSS T3色谱柱（100 mm x 2.1mm，1.7μm）分离，以0.1%甲酸溶液-乙腈（6/4，体积比）为流动相，0.3 mL/min等度洗脱，采用电喷雾电离，正离子多反应监测模式测定。甲奈威在一定浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数（r 2）≥0.99，3个加标水平的回收率81.0%~105.4%，相对标准偏差（RSD，n=6）为3.8%~15.8%，定量下限（LOQ）为0.005mg/kg。该方法快速、灵敏、准确，可满足肉中甲奈威残留量检测要求。
关键词：同位素稀释；液相色谱-串联质谱；凝胶色谱净化；甲奈威；测定
氨基甲酸酯类农药是一类广谱性农药，具有触杀、内吸作用，杀虫效果好，作用速度快，在农作物种植与中药材栽培中被广泛使用[1,2]。甲奈威（俗称西维因）是最早使用的氨基甲酸酯类杀虫剂，应用最为广泛。农药的不规范使用导致农作物上出现残留，进一步通过食物链污染畜产品，动物性产品的农药残留问题也越来越引起人们的关注[3]。国外对动物性产品中甲萘威残留量有明确的规定，国际食品法典委员会（CAC）、日本和欧盟[4]规定肉中甲奈威限量为0.05 mg/kg，美国限量为0.1 mg/kg。为突破国外的贸易壁垒，以及保障我国人民身体健康，必须建立痕量水平甲萘威的分析方法。
测定甲奈威等氨基甲酸酯类农药的方法很多，但由于甲萘威极性强、热稳定性差，测定时会造成分解，气相色谱-质谱法仅适用于热稳定性较好的氨基甲酸酯类农药[2,5]，液相色谱-紫外检测法由于检测限高，灵敏度较低，已经不能满足食品检测需要，柱后衍生-液相色谱-荧光检测法灵敏度较高，应用较多，但是需要专门的装置，操作繁琐[6~10]，液相色谱-串联质谱法由于灵敏度高，抗干扰能力好，在农药残留测定中应用越来越多[1,11~14]。
同位素稀释质谱法是一种快速、灵敏、准确的定量分析方法，可以有效地消除样品处理过程中待测物的损失和测定过程的基体效应等因素对分析准确度的影响，在食品分析中应用越来越广泛[15]，本文采用同位素稀释技术，结合GPC除去肉类基质中的脂肪等大分子物质，建立了肉类中甲奈威的液相色谱-串联质谱测定方法，简化了实验操作步骤，节省人力、物力。
1 实验部分
1.1仪器与试剂
TSQ Quantumn Ultra液相色谱-串联质谱仪，Xcalibur操作软件（美国Thermo公司）。LC-Tech凝胶渗透色谱仪（德国LC-Tech公司）， CR22GIII高速离心机（日本日立公司），R210 旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司），MILLI-Q 纯水器（美国Millipore公司），涡旋混匀器（美国Votex公司）。乙腈（色谱纯，德国默克公司）、乙酸乙酯、环己烷（色谱纯，美国迪马公司）；石油醚（沸程30℃～60℃，美国迪马公司）、甲奈威（98%，德国Dr.Ehrenstorfer），甲奈威-7d（98.4%，加拿大C/D/N ISOTOPE公司）
1.2色谱条件
色谱柱：Waters HSS T3色谱柱（100 mm x 2.1mm，1.7μm）；流动相：乙腈+0.1%甲酸水（40/60，体积比）。流速0.3 mL/min；柱温：室温；进样量10 µL。
1.3质谱条件
电离模式：电喷雾电离（ESI+），喷雾电压 3000 V，雾化条件：蒸发器温度 300 ℃，鞘气压力 40 Unit，辅助气压力 15 Unit。数据采集选择多反应监测模式
1.4样品制备方法
称取试样5.0 g，加入1 μg/mL的甲奈威-7d同位素内标溶液50 μL，摇匀后，加入适量水（肉样加水1.5 mL，肉制品加水3 mL），加40 mL丙酮，均质1 min，加氯化钠6 g，充分摇匀，再加30 mL石油醚，振摇30 min，静置30 min。取有机层上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1 mL，加2 mL乙酸乙酯-环己烷溶液（1/1，体积比）再浓缩，如此重复3次。乙酸乙酯-环己烷溶液定容为10 mL，0.22 μm滤膜过滤，进行GPC净化。
1.5 GPC净化方法
净化柱：400 mm×30 mm，装填Bio Beads S-X3凝胶，流动相：乙酸乙酯-环己烷（1/1），流速4.5 mL/min，进样量5 mL，馏分收集段10.0 min~15.0 min，在线浓缩加热温度45 ℃，真空度2.0×104Pa，替换溶剂：乙腈，替换次数：两次，定容体积1 mL。GPC定容液进行液相色谱-串联质谱测定。
2 结果与讨论
2.1
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