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植物细胞反应器简介

2020.7.21

植物细胞培养具有周期长、细胞抗剪切能力弱、易团聚等特点。同时,植物细胞规模培养的目的是生产天然产物,而这些天然产物均为细胞次生代谢物。所以,植物细胞培养反应器的设计,不仅要考虑有利于细胞生长,同时还要考虑有利于产物的积累和分离。总体上讲,适合植物细胞的反应器应该具有适宜的氧传递、良好的流动性和较低的剪切力。根据不同植物细胞生长和代谢产物积累的特点,目前已研究设计出多种类型的反应器用于植物细胞培养。

一、悬浮培养生物反应器

1机械搅拌生物反应器

尽管机械搅拌反应器已成功用于许多细胞的培养中,反应器内的温度、pH、溶氧及营养物质浓度较其他反应器更易控制等优点,但由于机械搅拌造成的剪切力对植物细胞造成较大的损伤,对次级代谢产物的合成也会产生影响,同时会带来染菌和机械上的问题,因此需筛选出抗剪切力的细胞系,也可对反应器结构进行改造,尤其是搅拌桨的结构和类型的改进,使其具有缓和、充分的搅拌效果。

2非机械搅拌式反应器

植物细胞的培养比较多地采用各种非机械搅拌生物反应器,其中常用的是气体搅拌生物反应器。气体搅拌生物反应器没有活动的搅拌装置,在很大程度上减少了剪切力,并能在长期操作中保持无菌。气体搅拌生物反应器包括鼓泡塔和气升反应器等。气体搅拌生物反应器结构较简单,氧传递效率高,剪切力低,对细胞的损伤小,容易实现长期无菌培养,较适用于植物细胞培养。

缺点:操作弹性小,低气速时尤其在培养后期细胞密度较高时,混合效果较差。如果提高通气量,又会产生大量泡沫,也易于驱除培养液中的二氧化碳和乙烯,对细胞生长有阻碍作用。过高的溶氧对植物细胞合成次级代谢产物不利。

二、固定化细胞生物反应器

1填充床生物反应器

细胞可以位于支撑物表面,也可包埋于支撑物之中,培养液流经支撑物颗粒,不断被细胞利用。优点:单位体积固定细胞量大。缺点:混合效果低,对必要的氧传递、pH、温度控制和气体产物的排除造成困难,影响细胞的培养。

2流化床生物反应器

利用液体的能量来悬浮颗粒。颗粒呈流化状态所需的能量与颗粒大小成正比,因此常采用小固定化颗粒,这些小颗粒良好的传质特性是流化床反应器的优点,缺点:剪切力和颗粒碰撞会损坏固定化细胞。

3膜生物反应器

采用具有一定孔径和选择透性的膜固定植物细胞。营养物质通过膜渗透到细胞中,细胞产生的次级代谢产物通过膜释放到培养液中。主要有:中空纤维反应器和螺线式卷绕反应器,优点:可以重复使用。

三、植物细胞反应器的选择和设计

植物细胞反应器的选择和设计需注意:

1氧的供给对于间歇培养,体积溶氧系数klα需要10-15h-1;

2剪切力反应器的剪切力尽可能小;

3细胞的黏附细胞培养过程容易黏附在反应器壁上,并产生大量的泡沫,导致细胞量和代谢产物减少,严重时培养过程被迫中止;

4细胞高密度培养时,混合情况变差,培养基中营养物质和氧的供给不足,细胞收率下降;

5温度、pH、营养物质的浓度须控制在合适的范围内。


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