临床常用血清酶同工酶及其亚型分析(3)
（三）测定方法
目前根据LD催化反应方向的不同，有两大类测LD方法，一大类为以丙酮酸为底物（反应方向P®L）的逆向反应（称LD-P法）；另一大类以乳酸为底物（反应方向L®P）的顺向反应（称LD-L法）。
临床上测定LD及其同工酶常用于诊断和鉴别诊断心、肝和骨骼肌的疾病。
LD同工酶测定常用电泳法、免疫沉淀法和免疫抑制法等。目前以琼脂糖凝胶电泳法更多用。一般成年人存在如下规律：LD2＞LD1＞LD3＞LD4＞LD5，部分正常儿童血中可见LD1＞LD2。
（三）临床意义
临床上测定LD同工酶有助于相应组织病变的诊断。心肌梗死和心肌炎时以LD1和LD2升高为主，且绝大多数的AMI患者血中LD同工酶都出现LD1/ LD2＞1，即所谓“反转比率”（flipped LD ratio）现象，且持续的时间长。骨骼肌和肝细胞损伤时常出现LD5＞LD4。急性肝炎时LD1和LD2相对下降，LD5升高；慢性肝炎时LD5升高，且LD1<LD3；肝硬化时仅检验地带网表现LD2下降和LD5升高；肝癌时LD5升高，但LD1＞LD3。当心梗并发充血性心力衰竭、心原性休克时，LD5也可升高。肺、胰、脾、淋巴结坏死和炎症及各种恶性疾病时LD2、LD3、LD4升高；溶血性疾病、镰形细胞性贫血、地中海贫血、体外循环术后引起溶血、阵发性睡眠性血红蛋白尿时均有LD1和LD2升高，但仍为LD2＞LD1；恶性肿瘤如转移到肝脏往往伴有LD4、LD5升高。
五、碱性磷酸酶及其同工酶
（一）生物化学特征
碱性磷酸酶（ALP）是一种含锌的糖蛋白，在碱性环境中（最适pH为10左右）可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物。ALP广泛存在于各器官组织中，其含量以肝脏为最多，其次为肾脏、胎盘、小肠、骨骼等。血清中ALP 主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内ALP大多数来自成骨母细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。人体各组织ALP同工酶可分为3大类，即胎盘ALP、肠ALP和肝/骨/肾ALP同工酶。
（二）测定方法
ALP的测定方法有多种，磷酸苯二钠比色法（King-Amstrong法）曾在我国应用较广。目前国内应用较多的方法为连续监测法，以磷酸对硝基酚（4-NPP）为底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）或二乙醇胺（DEA）激活型缓冲液为磷酸酰基的受体。4-NPP在碱性溶液中为无色，在ALP催化下，4-NPP分裂出磷酸基团，生成游离的对硝基苯酚。后者在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。在波长405nm处连续监测吸光度增高速率，计算ALP活性。
在骨生长、妊娠、成长、成熟和脂肪餐后分泌检验地带网等生理情况下，ALP活性可增高。除外上述生理性增高，临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病等的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。对于原因不明的高ALP血清水平，可测定同工酶以协助明确其器官来源。
六、酸性磷酸酶及其同工酶
（一）生物化学特征
酸性磷酸酶（ACP）是作用类似ALP的磷酸酶（最适pH在7.0以下），存在于人体不同组织，如前列腺、红细胞、血小板、肾脏、肝脏、脾脏、胃、肌肉及骨髓等，以前列腺含量最多。正常男性血清中ACP 约有1/3～1/2来自前列腺。ACP同工酶分前列腺ACP（PAP）和非前列腺ACP（如红细胞ACP、溶酶体ACP、破骨细胞或吞噬细胞ACP等）两大类，在前列腺中含有丰富的PAP，比其他组织约多100倍。测定标本以血清或肝素抗凝血浆为宜，应及时分离血清（浆）并尽早测定。
（二）测定方法
ACP的测定底物、原理和方法与ALP 相似，只是反应pH为酸性。如利用磷酸苯二钠法和磷酸对硝基酚法等在酸性条件下测定ACP。
（三）临床意义
ACP测定是诊断前列腺癌最重要的指标之一。前列腺癌时血清ACP活性显著升高，转移性癌患者可达40～50ULN。
七、淀粉酶及其同工酶
（一）生物化学特征
淀粉酶（AMY或AMS）是能将多种糖化合物水解成糊精、麦芽糖、和少量葡萄糖等产物的一组酶。人和动物只含a-AMY。人体中胰腺含AMY最多，由胰泡细胞合成后通过胰管分泌入小肠，唾液腺也分泌大量AMY入口腔开始消化多糖化合物，此外AMY还见于卵巢、肺、睾丸、横纹肌和脂肪组织中。肝中AMY很少乃至没有。
（二）测定方法
国内外目前测定AMY应用较多的是以麦芽多糖为底物的方法，如2-氯-对硝基苯麦芽三糖苷（CNP-G3）和亚乙基封闭的对硝基苯麦芽庚糖苷（4NP-G7）法（亦称EPS 法），以后者最常用，也是IFCC的推荐方法。
（三）临床意义
长时间以来，AMY水平一直作为评价胰腺外分泌功能的一种辅助诊断指标。
在急性胰腺炎发病后2～3h AMY开始升高（也有延至12h后升高者），多在12～24h 达峰值，2～5d下降至正常。如持续性升高达数周，常提示胰腺炎有反复，或有并发症发生。而尿AMY约于发病后12～24h开始升高，下降也比检验地带网血清AMY慢，因此在急性胰腺炎后期测定尿AMY更有价值。
临床上检测AMY用于胰腺炎诊断时，应注意AMY增高幅度与病情不成比例，如原AMY已升高却发生与症状不相应的降低时，常为凶险的坏死性胰腺炎的预兆。AMY水平正常也不能完全排除急性胰腺炎。
