食源性致病菌检测--显色培养基和快速鉴定培养基的应用
在培养基中加入某种特殊的化学物质,某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物,而这种代谢产物可以与培养基中的特殊的化学物质发生特定的化学反应,产生明显的特征性变化,根据这种特征性变化,可将该种微生物与其他微生物区分开来,这种培养基称为鉴别培养基。而显色培养基是一类利用微生物自身代谢产生的酶与相应的显色底物反应显色的原理来检测微生物的新型培养基。这些相应的显色底物是由产色基因和微生物部分可代谢物质组成的,在特异性酶的作用下,当具有某特异酶的细菌与酶底物作用时,使显色基团游离出来附着于菌落上,形成颜色独特的菌落(图1-1)。可根据菌落的颜色直接对菌属(种)做出鉴定(图1-2、图1-3)。
图1-1 不同显色培养基培养后的菌落状态
图1-2 大肠菌群显色培养基
蓝色菌落为大肠菌群菌落,白色菌落为杂菌。
图1-3 金黄色葡萄球菌显色培养基
紫色菌落为金黄色葡萄球菌,白色、蓝色菌落为杂菌。
现在食品中常见的病原微生物都有商品化的显色培养基,如沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌、单核增生李斯特氏菌等。大多数显色培养基只需在样品增菌后或直接分离后,培养18～24h,即可根据菌落的颜色对目标菌做出初步的筛选,快速、简便、节省时间;结果直观,仅根据菌落颜色判定,结果一目了然;灵敏度高、特异性强,大大减少了后续的鉴定步骤。
显色培养基同样具有任何选择性培养基都无法避免的问题——假阳性、假阴性。如97%的大肠埃希氏菌含有β-葡萄糖苷酶,可与显色培养基中的酶底物作用,产生蓝绿色的菌落;但肠杆菌科中约有10%的沙门氏菌及部分志贺氏菌、耶尔森氏菌属中也具有此酶,可产生假阳性的干扰菌落。再如,大肠埃希氏菌O157∶H7 β-葡萄糖苷酶是阴性的,在显色培养基中不能产生蓝绿色的菌落。所以不是所有具有特征性酶的微生物均能在含酶底物的培养基中表达阳性反应。但是与普通的选择性培养基比较,显色培养基假阳性、假阴性的概率相对要低得多。
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