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生物电镜样品选材办法和基本要求

2019.12.25

生物电镜样品选材办法如下:

高尔基体(Golgi apparatus,Golgi complex)亦称高尔基复合体、高尔基器。是真核细胞中内膜系统的组成之一。为意大利细胞学家高尔基Golgi于1898年用银染办法在神经细胞中发现。电镜下,高尔基复合体由三种基本成分组成即扁平囊泡、小泡和大泡,多位于细胞核与毛细胆管间的区域内。

电镜样品选材的基本要求

快 选材的动作要敏捷,zui好在资料离体后1min内就进入固定液,zui好不要超越10 min;解剖器械要尖利(可运用新的双面刀片),避免牵拉和挤压,尽量削减选材中的机械损害。

准 选材要精确。器官要精确;部位要精确:如胃肠道、皮肤和角膜、视网膜、耳蜗等一定要注意方向性,保证要调查的部位在切面方向。安排块的包埋方向与切面方向要十分清楚,尽量自己在包埋前进行定位。

冷 选材过程应尽量在低温下进行(0~4),以降低酶的活性,削减细胞内结构的损害。

小 所选资料体积要小,一般不超越1mm3,能够取成条状,但截面约1mmX 1mm。由于固定剂的浸透力较弱,若安排块太大,块的内部将得不到杰出的固定。

1 动物及人体安排的选材

动物安排的选材,应在麻醉(1%戊巴比妥钠按5ml/kg体重腹腔打针)或断头急性处死,解剖出所需器官,用解剖剪刀剪取一小块安排,放在干净的纸板上,滴一滴冷却的固定液,用新的、无油污尖利的(双面)刀片将资料切成大约1mm宽,2~3mm长的小块,再将其切成1mm3的小块,选材要尽量快速精确。如果有方向要求,如一些空腔器官、皮肤、角膜等,要注意方向性,保证需要调查的部位精确取到。zui后用牙签将这些小块逐一放入盛有冷的新鲜固定液的有盖青霉素小瓶里,放入冰箱冷藏室低温固定(4)。赶快送中心实验室进行处理。

2 培育细胞的选材

生长在培育瓶和培育板中的培育细胞选材时,悬浮细胞可直接离心,贴壁细胞应先倒出培育液,选用胰蛋白酶消化或用细胞刮刮下。而后带培育液进行离心(1000~1500 rpm)10 min左右。离心结束倒出培育液,管底的细胞团不要打散,沿管壁缓慢倒入适量的(一般为资料体积的5~10倍)2.5~3%戊二醛固定液,固定约1h,也可在4冰箱固定。赶快送中心实验室进行后固定,也可自己用1%锇酸固定后送样。

3 植物安排的选材

植物安排的选材比较容易,植物细胞离体后改变不像动物细胞那样敏捷,但植物细胞的细胞壁阻碍着固定液的敏捷浸透。因而,植物资料的选材宜切成薄片状,经适当固定后再切成小方块。


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