免疫电泳试验
免疫电泳试验
| 实验方法原理 |
免疫电泳试验是凝胶电泳与双向免疫扩散相结合的免疫化学技术。应用琼脂进行免疫电泳试验可分为以下二个步骤： 1.琼脂电泳 将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离，由于各种可溶性蛋白分子的颗粒大小、质量与所带电荷不同，在电场的作用下，其带电分子的运动速度（迁移率）具有一定规律，因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开来。以血清为例(图4-12A)，电泳后各种成分的位置是电泳速度与电渗速度的代数和。白蛋白分子量较小，所带负电荷较强，泳动最快，依次为α1、α2及β球蛋白，γ球蛋白泳动最慢。 2．琼脂扩散 当电泳完毕后，在琼脂板一端挖一条长的槽，加入相应抗血清，置湿盒内让其进行双向扩散。在琼脂板中抗原和抗体互相扩散，当两者相遇且比例适合时，可形成不溶性抗原抗体复合物，出现乳白色的特异性沉淀弧线（图4-12B、C)。 |
|---|---|
| 实验材料 | 待检血清 |
| 试剂、试剂盒 | 巴比妥缓冲液 人IgG 兔抗人血清抗体 |
| 仪器、耗材 | 琼脂 载玻片 打孔器 电泳仪 电泳槽 万用电表 |
| 实验步骤 |
1. 琼脂板的制备 将洁净之载玻片置于水平台面上，用吸管吸取 4ml1.2%热溶的琼脂于载玻片上，待凝固后按图4-13打孔及开槽。
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| 注意事项 |
1. 操作时动作要迅速小心，挖槽时要注意平行整齐，加入抗体不要外溢。 展开 |
| 其他 |
观察并描记沉淀弧的数目、位置及形状，参照免疫球蛋白迁移范围示意图（图4-14），识别主要Ig。
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