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准确检测血清血浆样本中microRNA的利器与应用

2012.12.03

  大量研究表明,血液循环中的microRNA表达变化指征着疾病的发生和发展阶段。同时,血液样品在临床易于获取,且稳定不易降解,因此对于microRNA标记物筛选具有广阔研究前景。

  血清/血浆样本用于microRNA研究的挑战

  • 血清血浆中不包含细胞,且microRNA含量低

  • microRNA高度同源,例如hsa-let-7家族各成员

  • 红细胞破裂发生溶血后,会释放抑制RT和PCR反应的物质

  • 常规内参(如U6等)在血清血浆中含量不稳定,不适合作为内参对照基因

  准确检测血清/血浆样本microRNA的利器

  丹麦Exiqon 公司miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片,将芯片的高通量优势与PCR的准确灵敏特点完整结合,实现对血清血浆等各种临床样本中的microRNA准确特异检测:

  • 基于LNA™ZL技术;独特的Universal RT反应

  • 康成microRNA研究技术服务超过8年,客户SCI文章60余篇,平均影响因子5.5分

  Human Serum/plasma panel(168 microRNA)

  专为精确检测血清血浆中microRNA设计,可直接用于microRNA标记物筛选

  - 重复性好:血浆样本,两次独立实验,相关系数R2达到0.96(图一)

  - 特异性强:区分单碱基差异microRNA;区分成熟microRNA和前体

  - 灵敏度高:准确检测血清血浆中microRNA,检测限低至5个拷贝

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图一 血浆样本PCR panel重复性实验

最低仅需20μL的血清/血浆样本,即可实现168个microRNA准确特异检测

- 独特的Universal RT反应:一次逆转录制备的cDNA可作为所有microRNA PCR反应的模板
- RNA需求量少,特别适合血清/血浆检测,最低于仅需20μL血清/血浆样本(图二)
- 统一逆转录,简化实验步骤,消除技术误差,提高准确性
- 所含168个microRNA,基于大量文献数据和Exiqon长期积累的丰厚研究成果

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图二 血清/血浆样本中miRNA检测结果

严格的质控系统,保障实验结果可靠性

- 溶血判定:实验前用Nanodrop检验样本溶血情况,避免抑制PCR的物质
- 评估RT反应效率:RT反应设置Spike-in
- 监测PCR反应过程:PCR芯片内设阳性对照
- 扩增结果判定:采用SYBR green的PCR方法,可根据溶解曲线判断扩增特异性
- 内参设置:选择血清血浆中稳定高表达的microRNA(miR-423-5P等)为内参,校正数据

Exiqon已在数千例癌症、免疫病等病人的血清/血浆中进行了microRNA筛查和验证

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